摘要:自然界异黄酮合成途径主要存在于豆科植物中。以微生物为宿主研究异黄酮代谢，则需要将整个相关代谢途径的多酶体系组装到工程菌种，从而进行表达及代谢研究，这就需要用到多基因的转化和共表达技术。综合应用了多基因单载体和多基因多载体方法，将大豆异黄酮代谢途径中的五个关键酶基因导入到大肠杆菌中，对异黄酮代谢途径在大肠杆菌中的构建和表达进行了研究和探索，获得了含有五个外源基因的重组大肠杆菌；重组菌经IPTG诱导，以L-酪氨酸为底物进行发酵，发酵产物经过HPLC测定，结果表明和空白对照相比有新的代谢产物生成，初步断定为异黄酮类化合物。

摘要:为了解龟板浸膏中对鼠骨髓间质干细胞体外增殖起促进作用的化学成分，用石油醚提取促进鼠骨髓间充质干细胞增殖的龟板有效部位，用MTT比色法及流式细胞仪研究了提取物调控鼠骨髓间充质干细胞活性，采用GC-MS技术研究了石油醚提取物的化学成分。初步结果表明，石油醚提取物能明显促进干细胞增殖，其主要成分是脂肪酸、甾醇和甾酮，且十八烷酸、十六烷酸和甾酮能起调控鼠骨髓间充质干细胞活性。龟板浸膏中，脂肪酸起调控鼠骨髓间充质干细胞增殖作用，这为龟板浸膏促进鼠骨髓间充质干细胞增殖又不引起干细胞过度生长的分子机制提供实验依据，也为中医药调控干细胞的研究提供重要的参考。

摘要:研究了培养基、植物生长调节素以及接种量对Vitex glabrata R.Br.悬浮培养细胞的生长情况以及对20-羟基蜕皮激素形成的作用。当细胞在添加有2.0mg/L BAP (6-苯甲酸嘌呤)和1.0mg/L 2,4-D的Gamborg's B5培养基中培养时细胞生长和20-羟基蜕皮激素的形成达到了最高水平。当接种量为20％PCV（积压细胞体积）时观察到了20-羟基蜕皮激素的最高产量，大约是1.1mg/(L·d)。实验数据也表明当接种量增加到20％PCV时，产量提高了7倍。

摘要:为了探索转基因体细胞核经连续核移植后的发育潜力，以转人组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞为核供体， MII期的卵母细胞质为核受体，利用胞质内注射法构建原代核移胚胎(G0)，并进行了原代核移植胚胎的继代核移植研究。比较原代和继代核移植胚胎在体外发育能力上的差异；在G1 、G2代核移植试验过程中，比较了供体胚胎细胞的发育阶段对核移植胚胎体外发育的影响。结果表明，原代核移植胚胎的卵裂率(76.45%±1.17%)与继代核移植胚胎的卵裂率(72.18%±1.97%，76.05%±2.38%，75.99%±2.84%)无显著性差异(P>0.05)。但原代核移植胚胎的桑葚胚率(47.20%±2.93%)、囊胚率(11.00%±1.42%)显著高于G₁、G₂、G₃代核核移植胚胎的桑葚胚率(34.99%±2.66%，28.23%±2.00%，23.34%±1.99%)、囊胚率(3.87%±0.67%，2.08%±1.66%，0)；在G₁、G₂中，当用16-细胞期核移植胚胎作为核供体时的桑葚胚率(29.57%±1.53%, 24.43%±1.87%)、囊胚率(1.96%±1.31%, 2.01%±1.34%)低于用32～64-细胞时期的核移植胚胎的桑葚胚率(34.32%±1.31%, 29.76%±1.66%)、囊胚率(3.86%±1.03%, 3.48%±0.34%)，但无显著性差异 (P>0.05)。由此得出结论：转基因体细胞核移植胚胎不宜进行多代克隆；胞质内注射法构建核移植胚胎，用32～64-细胞期的胚胎作为核供体构建的核移植胚胎的体外发育率高于用16-细胞期的胚胎作为核供体构建的核移植胚胎的体外发育率。

摘要:研究了体外培养一种孟加拉传统香蕉（Musa spp. Cv. Kanthali）的茎尖组织。茎尖的原始细胞表面经无菌处理（0.1% HgCl₂处理12min），接种6～15d后外植体地下茎部分仍有微生物污染（大部分是细菌），杀死了85％的外植体。为确定无污染培养基，将等量外植体分别浸泡在含400mg/L氨苄青霉素和200mg/L庆大霉素（两种光谱抗生素）的培养基中1h。结果表明，经抗生素处理的外植体完全没有污染，但培养3周后不能再生。进行二次继代培养后，其中一部分外植体吸收了培养基并胀大，颜色由苍白转变成浅绿或深绿。三次继代培养后数天，不再观察到外植体的生长，所有经抗生素处理过的外植体都开始死亡。在未经抗生素处理的活外植体中，单个茎发育的最佳培养基是：MS+4.0mg/L BA+0.5mg/L KT+15% CW，平均生长时间为18～21d，但再生率很低，只有30％。茎细胞增殖的最佳培养基是：MS+4.0mg/L BA+2.0mg/L IAA+15% CW，每个茎平均只萌发3～4个芽。最后，在添加0.5mg/L IBA的一半浓度的MS培养基中，体外培养茎最大生根率达到90％。

摘要:壳聚糖温敏凝胶是一种新型的可注射、在体固化的载体材料，该材料在室温条件下呈生理中性的溶液状态，在37℃左右可由溶液转变成水凝胶。该水凝胶对大分子药物具有良好的缓释效能，但对小分子药物缓释效能极差。 为制备同时缓释生长因子重组人骨形态发生蛋白- 2 (recombined human bone morphogenetic protein - 2, rhBMP-2)和抗菌药物氯己定的功能性壳聚糖温敏凝胶，将小分子药物氯己定先与β-环糊精制备成包结物，再将rhBMP-2与β-环糊精/氯己定包结物共混于壳聚糖温敏凝胶中，通过HAAKE粘度测量仪,对比加入目标药物前后系统的流变学性质，并且分别通过高效液相(high performance liquid chromatography，HPLC)和酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法测量目标药物的体外释放性质，温敏凝胶系统的流变学性质几乎未受加入药物的影响。而氯己定从凝胶系统中释放的速度大大减慢，药物持续释放可保持1月以上。同时，rhBMP-2也获得较好的缓释效果。 通过先行环糊精包结共混的方法，成功制备同时缓释rhBMP-2和氯己定的功能性温敏凝胶。

摘要:栓菌420（Trametes sp. 420）漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）进行异源表达，产生两种重组漆酶：rLacDx（具有天然N-末端）和rLacDe（N-末端带有8个额外的氨基酸残基）。摇瓶发酵18d，rLacDx和rLacDe的产量分别为1.21×10⁵u/L、7.38×10⁴u/L ［以2,2′-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸（ABTS）为底物］。在高密度发酵条件下，rLacDx的产量增加到2.39×10⁵u/L，同时其生产周期降至7.5 d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似，且在50℃和pH3～10的范围内均稳定。然而，rLacDx对底物ABTS的比活力（1761u/mg）高于rLacDe （1122u/mg），其表观K_m值(427μmol/L)低于rLacDe (604μmol/L)。

摘要:比较了以海藻酸钠为载体，用胶囊法、包埋-交联法、交联-包埋法三种不同方法固定化黑曲霉β-葡萄糖苷酶的效果，并研究了最佳固定化方法的固定化条件和固定化酶的部分性质。结果表明，交联-包埋法即β-葡萄糖苷酶与0.20%戊二醛交联后再用2.0%海藻酸钠包埋的固定化方法中酶结合效率和酶活力回收率最高。海藻酸钠浓度和戊二醛浓度对酶结合效率影响较大，戊二醛浓度和包埋颗粒直径大小对酶活力回收率影响显著。与游离酶相比，制备的固定化酶最适温度、最适pH值和K_m值分别由50℃、4.5和2.57 μg/mL下降到40℃、4.0和2.02 μg/mL。固定化酶具有更强的耐酸性和稳定性。该固定化酶用于大豆异黄酮活性苷元染料木素的合成，重复使用6次后，固定化酶的活力仍保持84.94%，染料木苷转化率为56.04%。

摘要:利用分批发酵研究了灵芝（Ganoderma lucidum）胞外多糖的合成特性，结果表明Ganoderma lucidum多糖合成和菌体生长呈部分生长关联型。菌体干重、胞外多糖分别达到15.56g·L^-1<、3.02g·L^-1<，胞外多糖对细胞干重得率系数(Y_p/x）为0.19。根据分批发酵试验结果采用Logistic方程、Luedeking-Piret方程和类似Luedeking-Piret方程，得到了描述灵芝生长、胞外多糖以及葡萄糖底物消耗分批发酵动力学模型。同时在初始葡萄糖变化较大范围内，试验数据与模型预测值进行了比较拟合，平均相对误差小于5％,表现出很好的适用性。表明该动力学模型对指导灵芝胞外多糖的发酵生产具有实际意义。

摘要:根据同源重组的原理，将来源于啤酒酵母工业菌株G03的γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因（GSH1）和筛选标记Kan取代质粒pRJ-5中18S rDNA内部约340bp的DNA片段，构建重组质粒pRKG。以pRKG为模版，PCR得到以18S rDNA为整合位点包含GSH1和Kan的基因片段18S rDNA::(Kan-GSH1)。用此片段转化啤酒酵母工业菌株G03，通过G418抗性筛选得到啤酒酵母工程菌。实验室小试表明，工程菌的谷胱甘肽含量比受体菌株提高16.6%，啤酒的抗老化能力得到了显著提高，而常规指标没有发生显著变化。连续传代5次后胞内GSH含量基本不变遗传稳定性良好。由于表达γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的基因来源于受体菌株自身，是通过自克隆技术改造工业啤酒酵母的一次有益的尝试。

摘要:从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到一株产高活性抗细菌物质的链霉菌GB-2。该菌的发酵产物对蜡样芽孢杆菌AS1.1846、金黄色葡萄球菌ATCC25923及6株耐药性金黄色葡萄球菌等11 株革兰氏阳性菌，大肠杆菌AS1.487、荧光假单胞菌AS1.1802等4 株革兰氏阴性菌有显著拮抗作用。纸层析对抗细菌物质分析结果表明，菌株GB-2所产抗细菌物质是中性的水溶性物质，其产生与海水的存在有显著相关性。发酵液稳定性研究表明，该物质在121℃，pH1 和pH12条件下抑菌活性均不变；紫外线照射也不影响其抑细菌活性。显示菌株GB-2产物在生防、食品及医药方面潜在的应用价值。

摘要:核酸序列中包含一定的蛋白质结构信息。根据通常情况下遗传密码表中密码子中间位的碱基配对时产生的氢键数目，尝试将20种氨基酸划分为两类，并用自编的计算机软件对蛋白质二级结构数据库中两类氨基酸的类聚现象进行了统计分析。结果表明，使用这种方法对氨基酸进行划分后，氨基酸残基具有较大概率与划入同一类的氨基酸残基相邻出现，并且这种聚集体对二级结构具有一定的偏好性。最后按照该方法设计了一段氨基酸序列并给出了预测服务器预测得到的结构。

摘要:病毒受体是病毒宿主范围和组织嗜性的决定因素。研究发现，至少有四种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8是口蹄疫病毒(FMDV)的受体，其中αv是4种受体的通用亚基。首次从口蹄疫病毒实验感染猪的肺组织中克隆到了通用亚基αv基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪αv亚基基因的编码区含有3141个核苷酸，编码1046个氨基酸，其N-端30个氨基酸为信号肽，其后的胞外域、跨膜区、胞浆域分别由955、29、32个氨基酸组成；胞外域含有11个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)、2个Ca²⁺结合位点(DX［D/N］XDGXXD)、18个半胱氨酸残基。猪αv基因与牛、人、猕猴、家鼠、鸡、犬的αv基因的核苷酸序列同源性分别为93.3%、91.5%、91.4%、85.6%、73.2%、89.9%，推导的氨基酸序列同源性分别为96.3%、94.6%、94.1%、90.8%、81.6%、93.8%，猪与牛αv亚基同源性最高，表明受体αv亚基可能与口蹄疫病毒的宿主范围有关。

摘要:从中国地方猪品种八眉猪（BaMei）肾脏组织中提取总RNA，采用RT-PCR方法克隆了猪SOCS-2(suppressor of cytokine signaling -2,细胞因子信号转导抑制因子-2)基因的cDNA序列，经T/A克隆，插入到pMD19-T载体上，导入大肠杆菌DH-5α，阳性克隆经PCR鉴定后进行测序，将测序结果与GenBank中已登录的人、大鼠和小鼠SOCS-2基因的序列进行同源性比较，利用生物信息学和分子生物学软件对猪SOCS-2基因编码的蛋白进行结构预测。结果表明：首次成功克隆了猪SOCS-2基因的cDNA序列（GenBank登录号为EF121242），其长度为822 bp,该基因ORF区核苷酸序列与其他物种相比同源性达到93%以上，氨基酸同源性则达到89%以上，生物信息学分析表明该蛋白分子量为22.25kD，等电点pI=8.30，包含199个氨基酸残基。该基因cDNA序列的克隆，有利于进一步研究SOCS-2调节机体发育的分子机理。

摘要:利用RAPD(Random amplified polymorphic DNA)分子标记技术，寻找谭清苏铁（Cycas tanqingii）中与性别相关的分子标记，筛选了160个10bp的随机引物，产生了2500多个RAPD条带。只有引物S0465 (CCCCGGTAAC)产生了一条大约500bp的雌性特异RAPD标记，该分子标记出现在所有的供试雌性植株中，而所有的供试雄性植株都不具有该标记。对该特异片段进行了克隆和序列测定，并根据序列分析结果将RAPD标记转化为重复性和特异性更好的特异特征序列扩增区域（SCAR）分子标记，并命名为STQC-S465-483。分子标记的建立可用于谭清苏铁幼苗性别的早期鉴定，为谭清苏铁就地保护和迁地保护提供技术支持。

摘要:利用RT-PCR方法扩增出西瓜花叶病毒HC-Pro的基因，长度为1371bp，并构建了真核表达质粒pPIC9K-WHC。将重组质粒经SalⅠ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株，经PCR鉴定与G418、MD和MM培养基筛选，获得Mut⁺/His⁺表型高拷贝转化子。经1%甲醇诱导5d后，SDS-PAGE检测发酵液上清，在66kD处有一特异蛋白条带表达。Western blot 鉴定表明，表达蛋白可以和HC-Pro蛋白抗血清发生结合反应。Far-Western blot 证明该蛋白能与西瓜花叶病毒CP蛋白结合，支持了HC-Pro蛋白协助传毒的“桥梁”学说。

摘要:根据已报道的大麦黄矮病毒GAV株系(BYDV-GAV)相关基因序列，利用RT-PCR方法获得ORF4基因。在杆状病毒-昆虫细胞系统中，成功表达了ORF4和GFP（绿色荧光蛋白）的融合蛋白(GFP: ORF4)，Western blot检测到目的蛋白的表达。利用激光共聚焦显微镜观察其在细胞中的积累和亚细胞分布，发现ORF4基因编码的17 kD蛋白（P4）能进入细胞核，并在细胞核膜上聚集。通过对ORF4基因编码的P4蛋白的N端和C端缺失突变结合蛋白质的结构预测分析，鉴定出N端α螺旋结构对于P4蛋白的核膜定位是必需的。这些结果为进一步研究ORF4基因在黄矮病毒GAV系统侵染中的生物学功能奠定了基础。

摘要:人白细胞弹性蛋白酶抑制剂为筛选炎症和癌症的重要靶点。应用白细胞弹性蛋白酶抑制剂高通量的筛选模型对数千株放线菌进行筛选，发现了阳性菌株N01WA-735。首先通过形态学和化学分类学鉴定其为链霉菌属。采用有机溶剂提取、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和结晶等方法对该菌株的发酵产物进行了分离纯化，得到活性单体化合物N01WA-735E，通过对N01WA-735E的理化性质和波谱数据分析，确定其结构与文献报道的化合物BE-52440A相同。该化合物对人白细胞弹性蛋白酶有很强的抑制活性，其IC50为3.02μmol/L。该化合物对人白细胞弹性蛋白酶的抑制活性国内外未见报道。

摘要:针对在传统的单克隆抗体制备过程中进行特异性筛选时大量的人力消耗，建立了一种联合应用蛋白质芯片进行单克隆抗体制备的方法。用8种重组蛋白分别免疫BALB/c小鼠，在传统的细胞融合的基础上，将8种抗原免疫的杂交瘤阳性细胞混合后进行克隆化、蛋白质芯片筛选，阳性细胞有限稀释克隆化制备相关抗体。实验结果：混合克隆化共得到单克隆细胞175孔，经蛋白质芯片筛选出阳性孔119孔，选择针对单一抗原阳性的细胞连续2轮克隆化，8种重组蛋白各获得单克隆抗体细胞株1株。与经典的单克隆抗体制备相比，蛋白质芯片筛选与混合克隆化技术联合应用于单克隆抗体制备，1个筛选周期获得了8种重组蛋白的单克隆抗体细胞株，提高了单克隆抗体的制备效率，节省了在筛选中的抗原用量，提供了一种经济、快速、简便的方法。

摘要:探讨了超声波辅助条件下脂肪酶催化高酸值废油脂转化为生物柴油的反应。来源于Aspergillus oryzae和Candida antarctica的固定化脂肪酶，在超声波辅助下，对高酸值废油脂转化为生物柴油具有高的催化活性。以来自于C. antarctica的固定化脂肪酶Novozym435为催化剂，以酸价为157mg KOH/g的高酸值废油脂为原料在超声波辅助下与丙醇反应，在脂肪酶用量为油质量的8%、初始醇油摩尔比为3∶1、反应温度控制在40～45℃、超声波频率和功率分别采用28kHz和100W的条件下，反应50min转化率达到94.86%。在此条件下，不同碳原子数（C₁～C₅）的直链和支链醇均有较高的转化率，在短链醇的选择上具有宽广的适应性。超声波还减少了反应产物和反应体系中其他黏性杂质在固定化脂肪酶表面的吸附，回收的Novozym435相较单纯机械搅拌条件下回收的外观干净、分散良好无结块现象、易于洗涤和再次利用，具有良好的操作稳定性。

摘要:为建立一种快捷和准确的方法用于新型杀真菌剂的筛选，以外源表达的稻瘟菌羊毛甾醇14α-去甲基化酶为靶酶，以市售烯唑醇、戊唑醇、三唑醇、三唑酮为DMIs类杀真菌剂代表，分析了靶酶活性、靶酶纯度和靶酶浓度对二者结合光谱的影响，并与生物测试结果比较分析其可靠性。结果表明靶酶的高活性、无其他P450干扰和合适的靶酶浓度是获得准确结合光谱的必要条件。烯唑醇、戊唑醇、三唑醇、三唑酮与靶酶结合常数（K,/i>_d）分别为0.143μmol/L、0.24μmol/L、0.257μmol/L、0.307μmol/L，该结果与其对稻瘟菌生长抑制能力(120h-EC₅₀)显著相关，证明结合光谱法可作为一种简便可靠的DMIs类杀真菌剂筛选方法。