摘要:人防御素是近年发现的人体内重要的内源性抗生素，已引起国内外生物和医学研究者的日益重视。这里综述了人防御素的组织分布、分子生物学特点、作用机理、医学及药用价值等方面的研究进展，对采用基因重组方法生产人防御素的方法进行了评述，并展望了防御素的应用前景和发展趋势。

摘要:了解ALK3在心脏发育中的作用，探索室间隔缺损的特异相关基因及其信号传导途径。应用α-MHC-Cre/lox P系统，建立了心脏ALK3基因敲除小鼠模型，利用PCR选择性cDNA差异显示法和基因芯片扫描(RNA microarray)的方法，比较对照组和试验组mRNA表达水平，筛选ALK3下游基因。对照组的mRNA来自α-MHC-Cre^+/-ALK3^F/＋的11.5d小鼠胚胎心脏，试验组的mRNA来自α-MHC-Cre^+/-ALK3^F/-的11.5d小鼠胚胎心脏。心脏特异的ALK3基因敲除后，血小板激活因子乙酰水解酶及转录因子Pax-8等基因的表达水平下降，β亚类14-3-3蛋白及蛋白酪氨酸激酶等基因的表达水平上调。血小板激活因子乙酰水解酶及转录因子Pax-8等基因可能是ALK3重要的下游基因，与室间隔缺损的形成有关；β亚类14-3-3蛋白及蛋白酪氨酸激酶等基因是骨形态形成蛋白信号传导途径的调控因子。

摘要:利用PCR方法从抗CD20单链抗体（ScFv）表达载体上扩增抗CD20抗体轻链可变区基因（V^L）、重链可变区基因（V^H），同时在抗体的可变区引入突变，然后将V^H、V^L基因重组到Fab′表达载体pYZF1中，构建抗CD20嵌合抗体Fab′片段表达载体，并在大肠杆菌16c9中进行高效可溶性分泌表达。经大量的筛选，获得一个产量和活性均有所提高的突变克隆。其突变位点在轻链可变区的CDR1区，即G77→A（Ser→Asn）。突变的抗体的表达量为每克干菌3.8 mg，而未突变抗体的表达量为每克干菌1.3 mg。突变体的亲和力常数K_a为2.2×10⁹ L/mol，约为突变前的2倍。竞争性免疫荧光抑制实验表明，突变的Fab′片段能竞争性抑制鼠源性抗CD20抗体HI₄₇和CD20表达细胞Raji细胞的结合，使HI₄₇的结合阳性率由98%下降至37.55%，体外细胞生长抑制试验亦证明突变的Fab′片段的抑制活性明显高于未突变的抗体。

摘要:通过RT-PCR扩增957bp的MAGE-3全长编码序列，将该片段克隆至Pgex-4T-2原核表达载体，转化大肠杆菌BL-21，经IPTG诱导表达，并经12%SDSPAGE凝胶电泳，考马斯亮蓝染色及Western blot鉴定，证明了目的基因的有效表达，目的蛋白高达细菌总蛋白的32%。表达产物经Glutathione Sepharose 4B 纯化后，每100mL菌液最终可获得3mg的目的蛋白，蛋白纯度在90%以上。纯化的GST-MAGE-3蛋白在体外冲击树突状细胞，能诱导特异性CTL杀伤肿瘤细胞活性。

摘要:L-乙内酰脲酶产生菌节杆菌 BT801的染色体DNA经Sau3A I 部分酶切后分离30kb左右的片段，与经HpaI和PstI酶切的黏粒载体Pkc505进行连接，将连接产物用包装蛋白包装，转染大肠杆菌DH5α得到10 000多个转化子，构建成节杆菌BT801的基因组文库。通过薄层层析等方法筛选得到了1个阳性克隆，通过亚克隆得到了乙内酰脲酶的完整基因，该基因能分别利用自身的启动子和T5启动子在大肠杆菌中进行表达产生有活性的蛋白。

摘要:获得结核杆菌热休克蛋白70在毕赤酵母中的分泌表达。构建了酵母表达质粒pPIC9K-hsp70，并将其线性化后用电穿孔法导入Pichia pastoris GS115，经PCR方法筛选出阳性菌落，在0.5%甲醇诱导下分泌表达。所得产物经离心收集上清、超滤浓缩脱盐、亲和层析后，分别用 SDSPAGE、Western blot和动物免疫实验对上清中的重组Hsp70进行鉴定，并考察产物对DC的作用。经SDSPAGE、Western blot分析表明表达的Hsp70表观分子量为70kD并能特异性地与抗Mt.Hsp70单抗结合，动物实验表明重组的Hsp70能在体诱导免疫应答。重组Hsp70能够诱导DC成熟并释放Th1型细胞因子。摇瓶发酵表达量达120mg/L，占培养上清30%以上。这为研究结核杆菌热休克蛋白70的生理功能提供了必要的物质条件。

摘要:获得特异性抗Ecp多克隆抗体，为进一步研究ecp的功能奠定基础。利用特异引物，通过RT-PCR扩增出编码Ecp蛋白的全长cDNA，克隆至谷胱甘肽S转移酶融合蛋白表达载体pGEX-4T-1(His)6C中，转染大肠杆菌DH 5α，经诱导表达后，利用谷胱甘肽琼脂糖珠从细胞裂解物中特异吸附融合蛋白，经凝血酶裂解，释放出Ecp蛋白，再经Ni-NTA亲和层析，最终获得高纯度的Ecp蛋白。用纯化的Ecp蛋白免疫新西兰家兔，亲和层析纯化抗Ecp抗体。利用该抗体进行的Western Blot结果表明：Ecp蛋白在野生型黑腹果蝇胚胎、三龄幼虫神经系统、成虫、成虫头部组织中均有明显表达，提示ecp可能是一个重要的管家基因。

摘要:超分支滚环扩增技术（Hyperbranched rolling cycle amplification, HRCA）在近几年中逐渐引起人们的注意，并越来越多的用于基础研究和实际检测中。在本文中我们对该技术在转基因植物检测中的应用情况作了较全面的探索；根据4种转基因植物中常用的外源基因或DNA片段设计了4条锁式探针（Padlock probe），利用质粒pKK2328中的一段序列作为锁式探针中的共同连接部分，并根据该共同的连接部分序列设计一对通用的HRCA引物；利用同位素标记的锁式探针对HRCA反应中的连接一步的特异性研究表明，只有当锁式探针和相应的检测靶DNA同时存在于连接体系中时，锁式探针才能被有效地进行连接，从线性分子变为环型分子，在没有相应靶DNA存在时锁式探针仅以线性形式存在；连接时间的研究表明，如果所检测的靶DNA是质粒或较短的DNA片段时，较短的连接时间（5～10min）就可以取得理想的最终检测效果,如果检测的靶DNA是复杂的植物基因组DNA时，连接时间需要较大程度的延长（30～60min）才能取得理想的最终检测结果；HRCA的反应时间研究表明,较长的反应时间可以明显增加最终产物的量；对Bst DNA聚合酶大片段酶用量的研究表明，在其它条件不变的情况下酶的用量可以在较大的范围内变化（0.5u～4u）而不影响最终检测结果；在上述研究的基础上，对转基因烟草进行实际检测，取得了与预期一致的理想结果。为了提高检测效率，仿效复合式PCR（Multiplex PCR，MPCR）的原理采用复合式HRCA（Multiplex HRCA, MHRCA）方法对转基因烟草进行检测，并利用反向点杂交进行结果分析，取得同预期完全一致的结果。我们的研究表明HRCA方法完全可以用于转基因植物的检测，而且其使用比MPCR技术更方便，效率更高。

摘要:ppsA和tktA是芳香族氨基酸生物合成中心途径的两个关键酶基因，在大肠杆菌中，ppsA基因编码磷酸烯醇式丙酮酸合成酶A（PpsA），该酶催化丙酮酸合成磷酸烯醇式丙酮酸；tktA基因编码转酮酶A，该酶在磷酸戊糖途径中生成4-磷酸赤藓糖起主要作用。采用PCR方法从大肠杆菌K-12株中扩增到ppsA和tktA，并实现了两基因的高效表达，其中ppsA活性提高了10.8倍，tktA活性提高了3.9倍，当这两个基因串联在一个质粒上导入大肠杆菌进行表达时，PpsA的活性变化较大（2.1～9.1倍），TktA的活性相对稳定（3.9～4.5倍），且这两个基因单独表达和串联表达都能使芳香族氨基酸生物合成共同途径中关键中间产物DAHP的产量提高，且串联表达比单独表达较高。

摘要:发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）ATCC15834感染三裂叶野葛(Pueraria phaseoloides)叶片外植体20 d后产生毛状根,毛状根可直接从叶片外植体叶脉处或从叶脉处产生的愈伤组织上产生。感染35d后,约85%的叶片外植体产生毛状根。毛状根能在无外源生长调节剂的 MS固体和液体培养基上自主生长。PCR扩增结果表明，发根农杆菌Ri质粒的rolB和rolC基因已在三裂叶野葛毛状根基因组中整合并得到表达。与固体培养的毛状根相比,在液体培养基中培养的毛状根不仅生长迅速,也不会形成愈伤组织。在无外源生长调节剂的液体MS培养基中培养15d的三裂叶野葛毛状根的鲜重、干重、可溶性总糖含量及细胞内活性氧(ROS)含量分别为固体培养毛状根的1.59倍、1.18倍、5.25倍和1.16倍。

摘要:小鼠的造血系统起源于胚胎发育7d的卵黄囊胚外中胚层，研究表明胚胎干细胞（Embryonic stem cells, ES cells）体外分化模型能够模拟卵黄囊造血的发生过程；此外，诱导ES细胞体外定向造血细胞分化对于建立治疗性克隆以治愈多种血液病具有重要的研究和应用价值。高增殖潜能集落形成细胞（High proliferative potential colonyforming cells, HPPCFC）是体外培养的最原始的多潜能造血前体细胞之一。本研究发现：小鼠ES细胞在体外分化5～14d形成的拟胚体中含有HPP-CFC。其再生潜能与胚胎期9d的卵黄囊来源的HPP-CFC相似，与骨髓来源则不同。RT-PCR分析表明：ES细胞来源的HPP-CFC表达与造血干细胞增殖相关的特异性转录因子和多种造血生长因子受体。但分化12d的拟胚体细胞和HPP-CFC集落细胞移植受致死剂量照射的小鼠不能产生典型的脾结节。因此，ES细胞来源的HPP-CFC在体外和体内造血活性的差异值得更深入地研究。

摘要:植物体通过一系列生理生化反应的改变来适应干旱胁迫。对干旱/复水及秋水仙素处理后再干旱/复水的仙鹤藓(Atrichum undulatum)原丝体细胞中微管骨架的动态变化进行了研究，发现干旱处理后细胞内微管骨架从有规律排列的较细的丝状形式转换为无规律排列的较粗的微管束；复水后微管骨架的结构和分布与对照细胞中无明显区别；秋水仙素处理后再干旱/复水的细胞中，微管骨架呈分散的棒状或点状分布，而且原丝体丧失了干旱胁迫后正常复水的能力，进而导致细胞不能恢复正常的生理活动。因此认为，微管骨架在仙鹤藓原丝体适应干旱逆境的过程中起着重要作用。

摘要:哺乳动物工程细胞在大规模培养生产重组蛋白时很容易发生细胞凋亡，从而导致生产过程提前终止，造成生产成本高昂。细胞代谢产物氨已被证明可以促进细胞凋亡，而线粒体膜整合蛋白Bcl-2可以通过促进线粒体膜完整性而抑制细胞凋亡。本实验应用谷氨酰胺合成酶加压系统在CHO工程细胞中高效表达中国仓鼠Bcl-2蛋白，使细胞具有抗凋亡能力的同时，利用谷氨酸和氨合成谷氨酰胺而有效降低培养基中氨的含量，从而达到抑制细胞凋亡的目的。

摘要:利用硫酸铵沉淀、羟基磷灰石柱层析、Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE-52离子交换柱层析的方法，将枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶纯化了30.75倍，同时,该酶比活达到3478056 u/mg，收率达到23.43%。利用SDS-PAGE凝胶电泳和Sephadex G-75凝胶过滤的方法测得枯草芽孢杆菌SA-22 β-甘露聚糖酶的分子量分别为38 kD和34 kD。实验发现该酶的最适pH为6.5，在pH 5～10的范围内稳定；该酶最适温度为70℃，在50℃保温4h后其活力不变，在60℃保温4 h后剩余酶活为74.2%，70℃的酶活半衰期为3h。实验还发现Hg²⁺对酶活力有明显抑制作用。该酶对槐豆胶和魔芋胶的K_m和V_max值分别为11.30mg/mL, 4.76mg/mL和188.68(μmol·mL^-1·min^-1), 114.94(μmol·mL^-1·min^-1)。

摘要:为提高游离脲酶的稳定性，将游离脲酶用硫酸铵沉淀下来后，以戊二醛作为交联剂对其进行化学交联，制备新型的固定化脲酶交联脲酶聚集体，并对其酶学性质进行研究。交联脲酶聚集体的最适pH、最适温度和K_m值分别为：pH 8.0、70℃和0.021 mol/L。在对交联脲酶聚集体的热稳定性，储存稳定性，和对抗蛋白水解酶的能力的研究中，交联脲酶聚集体均显示了比游离脲酶更高的稳定性。为考察其使用效果和稳定性，将其与包醛氧淀粉联合，用于慢性肾衰动物模型的口服治疗。以腺嘌呤灌胃法(每天300mg/kg, 共30d)制备慢性肾衰动物模型,将23只大鼠随机分为模型对照组(每天以10mL/kg蒸馏水灌胃)、单纯包醛氧淀粉组(给予含包醛氧淀粉饲料，10mL/kg蒸馏水灌胃)和包醛氧淀粉+交联脲酶聚集体组(给予含包醛氧淀粉饲料，交联脲酶聚集体悬浮液10mL/kg灌胃)，经2周治疗后, 模型对照组、治疗对照组和治疗组实验前后的肌酐含量均有小幅下降，但差异不显著(P值分别为0.922、0.972和0.225＞0.05)。模型对照组的尿素氮含量变化不明显(P=0.211＞0.05)。治疗对照组和治疗组实验前后的尿素氮含量均明显下降(P值分别为0.004和小于0.001，均小于0.01)。治疗对照组和治疗组实验前后的尿素氮含量下降量比较，有显著性差异(P=0.016＜0.05)。治疗组尿素氮含量下降更明显。说明交联脲酶聚集体和包醛氧淀粉联合使用时，对尿素的清除效率比单纯使用包醛氧淀粉更高。

摘要:为获得MUC1/Y的特异表位肽，制备抗体，用PCR扩增其编码序列，克隆到pGEX-2T中，转化DH5α感受态，0.2mmol/L IPTG诱导表达，超声破碎或BPER-TMⅡ试剂处理诱导菌，亲和层析和阴离子交换纯化目的蛋白，SDSPAGE及Western blotting鉴定；免疫家兔制备多抗，初步用于免疫组化分析。结果表明，转化菌经诱导后表达融合蛋白GSTY30，约占菌体总蛋白的20%，大多以可溶形式存在，与诱导温度无关。免疫家兔获得多抗，效价为1∶320 000，纯化的抗体具有特异性，可识别肿瘤细胞表面的MUC1/Y蛋白。所得蛋白和抗体可用于MUC1/Y的表达特征及其生物学功能研究。

摘要:利用通过基因工程技术所构建的在细胞内同时表达出高特异性镍转运蛋白和金属硫蛋白的基因工程菌富集水体中的镍离子。菌体细胞对Ni²⁺的富集速率很快，富集过程满足Langmuir等温线模型。与原始宿主菌相比，经基因改造的基因工程菌不仅最大镍富集容量增加了5倍多，而且对pH值、离子强度的变化及其它共存重金属离子的影响都呈现出更强的适应性。相比而言，Na⁺、Ca²⁺、Cd²⁺、Pb²⁺的影响较小，但Mg²⁺、Hg²⁺和Cu²⁺所引起的负面效应较大。进一步的实验表明基因工程菌对Ni2+的富集行为不需要外加营养物质。

摘要:以链脲佐菌素Streptozotocin（简称STZ）为糖尿病的诱因，以NO自由基含量为响应指标，建立了体外小鼠胰岛水平糖尿病药物筛选模型。当STZ作用浓度在0～50mmol/L内变化时，培养液中被检测到的NO大部分是来源于STZ溶于水后释放出的，而很小一部分是由胰岛培养物自身释放的，后者稳定在30～35mmol/L之间。另一方面，NO含量与胰岛素分泌量的剂量关系表明NO的增加伴随着胰岛素分泌量的下降，这标志着NO对胰岛功能的氧化性损伤，从而验证了NO作为该模型响应参量的可靠性。最终确定STZ致胰岛NO自由基损伤模型中STZ的作用浓度为5.0mmol/L，此时NO含量和胰岛素分泌量分别为STZ未加入前的10.81倍和0.43倍。最后应用该模型，快捷地考察了不同铬含量的魔芋葡甘露寡糖铬络合物（简称KOSCr）清除NO自由基的能力。

摘要:采用Clontech链转换建库试剂盒，建立了中国长白山乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库，从中克隆了金属蛋白酶/解整合蛋白Ussurin,并进行了序列分析。结果显示，Ussurin开框读码序列由1434bp组成，编码478个氨基酸。由核苷酸顺序推导的氨基酸序列可以看出，Ussurin最初的翻译产物是酶原前体；依次含有18氨基酸组成的信号肽，171氨基酸组成的酶原区和由289氨基酸组成的Ussurin（200氨基酸组成的金属蛋白酶结构域、16氨基酸组成的间隔区和73氨基酸组成的解整合蛋白结构域）。Ussurin的金属蛋白酶结构域含有3对二硫键；解整合蛋白结构域含有6对二硫键和特征性RGD(精氨酸甘氨酸天冬氨酸)结构。其基因序列和结构域组成与GenBank中蛇毒金属蛋白酶/解整合蛋白呈现高度同源性属于P-Ⅱ。氨基酸序列blast比对发现，酶原区和解整链蛋白结构域呈现极高的同源性，而金属蛋白酶结构域却出现了极高的变异，推测这些变异结构区是为了适应不同的底物、不同受体或同一受体的不同结构域。

摘要:研究了24～32℃范围内产朊假丝酵母生产谷胱甘肽的分批发酵过程，发现较高温度对细胞生长有促进作用，而较低温度则更有利于谷胱甘肽产量的提高。应用改进的Logistic和LuedekingPiret方程分别对细胞生长动力学和谷胱甘肽合成动力学进行了模拟，得到不同温度下各种动力学参数。在此基础上，进一步研究了温度同细胞生长动力学参数之间的内在联系，得到谷胱甘肽分批发酵过程中细胞浓度的变化同温度以及底物浓度之间的一般关系式：dX-dt＝［0.0224(T+1.7)］2X(1-X/X_max)1+S｛8.26×10.6×exp［-31477/R/(T+273)］｝。验证实验结果表明，该模型具有很好的适用性。

摘要:玉米大斑病是严重危害玉米生产的一个世界性真菌病害。由于玉米大斑病菌（Exserohilum turcicum）在无性生长过程中迅速产生黑色素，致使原生质体难以分离。测试了包括Fungase、Funcelase、Novozyme、Glucanex、Driselase、Uskizyme、Kitalase在内的7种细胞壁降解酶及其组合、病原菌菌株和培养基对原生质体分离效果的影响。结果表明菌株的培养形态和菌丝的生长状态显著影响原生质体的分离效率；酶组合Kitalase+Glucanex+Driselase, Kitalase+Glucanex和Kitalase+Uskizyme能够有效地分离玉米大斑病菌的原生质体。初步的转化试验表明，质粒pAN71可以用于该病原菌的转化。这些结果将为E.turcicum和Exserohium属其它真菌的基因克隆提供一些有用的信息。

摘要:采用TDPCR(Touch down PCR)法从水母雪莲(Saussurea medusa Maxim)红色系愈伤组织cDNA文库中筛选并克隆了雪莲Myb转录调控因子SmP (S.medusa Maxim Mybrelated P gene)基因。序列分析表明该基因全长969bp，包括一个771bp的完整开放阅读框架（ORF），编码一个256氨基酸残基的蛋白质。氨基酸序列的同源性分析表明在N-端具有两个典型的R2R3-Myb-DNA结合结构域。C-端富含亲水的丝氨酸S(18.38%),且以寡聚体的形式存在，具有转录调控因子激活结构域常见的特征。

摘要:考察了培养基组成、培养时间、接种量、pH值、肌醇浓度等对冠瘿组织生长及其人参皂苷含量的影响；用HPLC检测了冠瘿组织中人参皂苷Re和人参皂苷Rg1的含量。 高压纸层析电泳证实，根癌农杆菌Ti质粒上的TDNA片段已整合进入植物细胞核基因组中。在考察的6种培养基中, White培养基最适合人参皂苷Rg1的累积（0.095%），MS培养基最适合人参皂苷Re的累积（0.194%）。以MS为基本培养基培养36d、32d时人参皂苷Re和人参皂苷Rg1累积含量最高(分别为0.147%和0061%)；接种量为4g、2g (FW/flask)，有利于人参皂苷Re和人参皂苷Rg1的累积；培养基pH 5.8时人参皂苷Re含量最高(0184%)，培养基pH 5.6时人参皂苷Rg1累积量最高(0.054%)；肌醇浓度为0.05g/L时，能促进人参皂苷Re合成(0.182%)，浓度为0.30g/L时，有利于人参皂苷Rg1累积（0.055%）。

摘要:利用定点突变的原理，获得包含有口蹄疫病毒P1，2A，3C及部分2B编码区的目的基因片段，KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后，定向克隆于真核表达质粒载体pcDNA3.1（+），经筛选、鉴定及DNA序列分析后，将重组质粒pcDNA3.1/P12X3C转染BHK-21细胞，通过双抗体夹心ELISA方法和间接免疫荧光标记方法，检测细胞中表达的口蹄疫病毒抗原。结果表明，口蹄疫病毒基因片段正确克隆到真核表达质粒载体上，重组质粒pcDNA3.1/P12X3C可在BHK-21细胞中表达FMDV目的蛋白。