摘要:酶工程的研究已经发展到分子水平，通过基因操作，已实现了许多酶的克隆和表达。定点突变成为研究酶结构与功能的常规手段，并被广泛用于改善酶的性能。体外分子进化方法则大幅提高了酶分子的进化效率，并有可能发展新功能酶。融合蛋白技术的发展使构建新型多功能融合酶成为可能。这里对分子酶工程学的研究与发展情况进行了综述。 

摘要:细菌冰核基因的应用研究已成为生物冰核领域的研究热点，研究涉及细菌细胞表面展示、促冻杀虫、报告基因、病原微生物高敏检测、作物抗寒育种等多个领域，显示良好应用前景。通过对国外在该方面的研究现状的综述，和我们在冰核基因促冻杀虫研究方面重要进展的介绍，对今后我们拟开展的这一研究工作进行了展望。

摘要:农杆菌渗入法（Agroinfiltration） 是近几年发展起来的一项快速、高效、重复性好的植物瞬间基因表达系统，已应用于外源基因表达分析、防卫反应、基因沉默、启动子分析及分离新的防御基因等领域。介绍了Agroinfiltration 的原理、技术及其在植物分子生物学研究中的应用，并结合我们的经验介绍了对该项技术的改进。 

摘要:原核细胞、酵母细胞以及昆虫细胞相比，中国仓鼠卵巢细胞（CHO）作为宿主细胞表达的外源蛋白最接近其天然构象，因而CHO细胞表达系统是生物工程制药最为理想的表达系统。但这种系统也存在诸多缺点。如在大规模培养中CHO细胞会面临着对无血清培养基的适应性差、细胞无限度增殖以及细胞凋亡等很多难题。所以除了在培养基、培养条件和表达载体方面下功夫优化该系统外，对CHO细胞本身进行改造已成为优化CHO表达系统的另一热点。 

摘要:为探索大肠杆菌λ噬菌体表达调控元件在链霉菌中的应用，构建了一个链霉菌大肠杆菌穿梭表达载体pHZ1080，并将来自链霉菌FR-008的聚酮合酶(PKS)基因置于其中的λ噬菌体启动子P_R下游，得到表达PKS的穿梭质粒pHZ1067。与在大肠杆菌中一样，该质粒在变铅青链霉菌中也受热诱导表达100kD的PKS蛋白；表达的PKS蛋白可由SDSPAGE和Western-blot实验检测到。PKS在链霉菌中的热诱导表达表明，构建的载体也能用于链霉菌诱导表达外源基因。  

摘要:依据本室获得的人TPO模拟肽序列，合成了该模拟肽的DNA序列，分别连接至4种不同长度的人IgG1 Fc基因片段的5′端，并克隆至质粒表达载体pET28a(+)，转化大肠杆菌BL21(DE3)，筛选获得了4种重组工程菌，其中3种分别高效表达了3种不同长度的融合蛋白，而第4种工程菌未表达。表达的3种融合蛋白的分子量分别约为28kD、12kD和12kD，表达量约占菌体蛋白总量的30%左右，纯化获得了3种TPO模拟肽融合蛋白。3种融合蛋白均有较好的体外活性，维持TPO依赖细胞Ba/F3-mp1生长的EC50分别为：13、10、10 nmol/L。用血小板减少症小鼠动物模型，测定了它们的体内活性，3种融合蛋白均有升高血小板和缩短血小板恢复时间的功能，分别比TPO模拟肽活性提高了18、8、8倍；而对白细胞及红细胞无显著影响。分别用3种融合蛋白免疫BALB/c小鼠，均未刺激小鼠产生抗TPO模拟肽抗体，并显示了较好的应用潜力。 

摘要:地中海拟无枝菌酸菌U32是力复霉素SV的工业产生菌，其遗传操作一直是一个难题。在该菌株DNA高效电转化的基础上，利用同源重组的原理，建立了地中海拟无枝菌酸菌染色体的基因置换/中断系统。通过大肠杆菌重组质粒pDK110构建、转化及两步重组筛选，成功地用α淀粉酶基因（amy）取代了地中海拟无枝菌酸菌U32染色体上的3-氨基-5-羟基苯甲酸合成酶基因（ahbas）。第一步单交换和第二步双交换的频率分别是0.5%～0.7% 和 2%。将质粒pDK110变性后转化可显著提高重组频率，在第二步筛选双交换前对单交换重组子进行电击也能够提高其双交换重组的频率。此外，通过转化构建的两端带同源区段的线性DNA片段及一步重组筛选，我们在地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的amrD,rifO基因中间插入了阿普拉霉素抗性基因（apr），其效率约为30～50转化子/μgDNA。

摘要:应用PCR技术从具有分泌蛋白能力强且没有胞外蛋白酶活性的短短小芽孢杆菌50中分离出细胞壁蛋白基因的多启动子和信号肽编码序列，利用它与质粒pUB110和pKF3一起构建成穿梭分泌表达载体pBKE50。将α淀粉酶基因引入该载体转化短短小芽孢杆菌50后，发现α淀粉酶可以活性形式分泌表达。此工作为下一步建立短短小芽孢杆菌高效分泌表达系统奠定了基础。

摘要:对基因枪法获得的明恢81转修饰的cry1Ac基因当代植株进行花药培养，共接种花药2600枚，获得83份花培植株，其中双倍体植株43份，单倍体植株40份。 PCR结果表明含有cry1Ac基因的植株55份，花培植株群体中转基因与非转基因植株的比值为2∶1（55/28）。进一步结合Southern blot和ELISA分析，于花培植株当代筛选到转基因纯合株系36份。外源蛋白表达量上，花药来源于同一克隆的DH系的不同植株之间基本一致，最高的Cry1Ac含量达0.25%。田间抗虫性试验表明，经花药培养纯合获得的部分转基因纯合系植株对二化螟(Chilo suppressalis)表现出高抗，而且主要农艺性状保持不变。以上结果表明水稻花药培养可以加速转基因的纯合与育种利用。

摘要:对影响寡核苷酸微阵列检测点突变的敏感性和特异性的各种因素，如杂交液、杂交温度、标记引物浓度及其比例等，进行了研究。采用不对称PCR扩增有利于敏感性提高；多重不对称PCR不影响杂交的特异性，且敏感性有所增加。对30例肺癌标本进行寡核苷酸微阵列检测，发现12例标本发生了P53基因点突变，K-ras突变有5例。与测序结果相比，P53基因突变符合率达到80%。由于检测样本较少且检测位点不完全，因而未得到K-ras和P53基因突变与肿瘤的种类、病期及吸烟之间的明显相关性。

摘要:Smad3基因剔除导致小鼠骨关节炎。为了进一步深入研究Smad3基因缺失导致骨关节炎形成的分子机制，寻找骨关节炎发生早期的分子变化。用双向电泳技术结合肽质量指纹谱技术对Smad3基因剔除小鼠和野生型小鼠血清蛋白质组进行了初步分析。对其中7个表达差异蛋白质进行了鉴定，并探讨了所鉴定蛋白质与骨关节炎发生的关系。为揭示SMAD3介导的TGF-β信号在骨骼发育中的重要作用提供了线索。 

摘要:研究了蜜环菌胞外漆酶合成条件和酶学性质。实验表明，培养基初始pH5.5、培养温度25℃有利于菌株产酶；与麦芽糖、山梨糖和半乳糖相比，纤维二糖和棉子糖作为碳源时漆酶产量更高；有机氮源比无机氮源有利于漆酶合成。泥炭提取液可显著诱导漆酶生成，当其含量为50%时，菌株漆酶最高产量是对照组的7倍。在蜜环菌发酵上清液中检测到3个漆酶同功酶组分，其主要活性（约占75%）组份漆酶A经 (NH₄)₂SO₄沉淀、制备级PAGE电泳和阴离子交换柱层析被分离纯化至电泳均一，SDSPAGE法测得酶亚基分子量59kD，凝胶过滤色谱法测定活性酶分子量58kD。纯化的漆酶A等电点pI为4.0，氧化愈创木酚的最适反应pH为5.6，最适温度为60℃，在60℃和65℃时半衰期分别为45min和36.8min，在pH5.2～7.2范围内稳定性较好。100mmol/L Cl^-对该酶有显著抑制作用，1mmol/L SO^2-₄ 对漆酶有激活作用，1mmol/L NaN₃可完全抑制酶活性，10 mmol/L EDTA对漆酶活没有明显影响，1mmol/L Cu²⁺对漆酶有激活作用。以愈创木酚为底物时，测得酶的K_m=1.026mmol/L，V_max=5μmol/(min·mg)；以ABTS为底物时，测得其K_m=0.22mmol/L，V_max=69μmol/(min·mg)。

摘要:在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒（HEV）ORF2的a.a.394～a.a.604片段，得到的重组蛋白NE2在SDSPAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在，二聚体对病人血清的反应性明显强于单体；质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的多种聚体；动态光散射测定表明平均分子半径约4nm，相当于四聚体，但分散度较大，提示为多种大小不一的聚合体的混合物。这些证据表明NE2蛋白可形成以同源二聚体为基本单位的多种聚合体形式，其中以二聚体间的结合最为紧密，并且以二聚体为基础可进一步装配出多种更高级结构，从而具有作为HEV疫苗及诊断试剂抗原的良好前景。 

摘要:利用差异显示（Differential display）及H.Y-Yellow琼脂糖凝胶分离等方法，从冷胁迫和甘露醇共同处理的冷敏感水稻（Wase toitsu）根的总RNA中，分离出冷胁迫诱导的cDNA片段，经过测序和同源比较，发现它是一尚未报道的新基因片段。这一基因的表达对温度具有敏感的反应特性，4℃时表达水平明显增加，在正常温度（25℃）下，其表达水平又可快速降低。当幼苗根用0.5mol/L甘露醇预处理2h后，转入冷胁迫，其低温诱导的表达水平增加更为明显。在甘露醇预处理之前加入咖啡因处理根1h，其表达水平明显降低，几乎与正常温度下的对照相同。据此推测，这一基因可能参与了冷胁迫或水分胁迫诱导的耐冷过程中咖啡因敏感信号的传导。 

摘要:将传染性法氏囊病病毒(IBDV)细胞致弱株(JD1株)的基因组A节段基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pAcHLT-C中，获得的重组转移载体pAcHLT-C-A与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕培养细胞，获得重组病毒BacPAK-A。DIG标记的DNA点杂交证实重组病毒基因组中含有A节段基因，重组病毒感染家蚕5龄幼虫进行表达， ELISA和Western blotting等结果表明多聚蛋白基因在蚕体内得到了表达，表达产物具有免疫反应性，表达量在感染后5～6 d达到最高。家蚕生物反应器表达IBDV多聚蛋白具有我国的资源优势，为今后研制低成本、实用化的IBDV基因工程疫苗打下基础。

摘要:利用重叠PCR技术突变了sea基因上一个稀有密码子簇，将此段中稀有密码子全部更换成E.coli最常用密码子，得到sea^m。将sea和sea^m分别克隆于7ZTS表达载体上，并转化JM109（DE3）菌株。结果表明，sea基因的表达十分微弱，而sea^m基因的表达量十分高，约占菌体总蛋白的15 ％。表达产物在体内具有一定的抗肿瘤活性。

摘要:以转1磷酸甘露糖醇脱氢酶基因的八里庄杨为试材，对获得的杨树转化体进行了不同NaCl梯度的组织培养、水培和盆栽试验。抗盐试验中，转基因八里庄杨比对照的始分化天、分化率、芽头密度、苗高、生长势、生根率明显得到提高；主根数、侧根数、根长的发生数量均较多。结果表明在4‰含盐量的基质上，转基因苗木比对照有更好的抗性。 

摘要:依据光合细菌生长代谢特性和有机废水降解主要产物类型，11种有机物被用于沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）Z菌株的光合产氢研究，其中，乙酸反应体系产氢活性最高。在此基础上，研究了该菌株的生长与产氢动力学行为，探求了影响该菌株光合放氢的主要限制性影响因素。结果表明，该菌株产氢与生长部分相关。种子培养基和菌龄对产氢活性有明显影响。细胞最适产氢和生长所需要的光照强度和温度基本一致。当种子来源于硫酸铵高菌龄预培养物或谷氨酸钠对数期预培养物时，该菌株产氢活性显著增加，产氢延滞期明显缩短。氧浓度和接种量对产氢活性也有显著影响。供氢体和氮源浓度直接决定细胞的生长与光放氢活性。在低于70 mmol/L乙酸钠和15 mmol/L谷氨酸钠时，产氢活性随底物浓度的增加而增强。谷氨酸钠浓度高于15mmol/L时，由于游离NH₄⁺的出现，产氢活性受到抑制，但却明显刺激细胞的生长。在标准状况下，该菌株的最大产氢速率可达19.4 mL·L^-1·h^-1。

摘要:气提式内循环反应器具有很好的生物硝化性能，能承受高进水氨浓度（78.49mmol/L），具有高容积转化效率（163.18 mmol/L·d），运行性能稳定（氨去除率保持在94.42%以上）。在气提式内循环反应器的运行过程中，可产生硝化颗粒污泥。颗粒污泥开始出现的时间约为45d，颗粒污泥的粒径平均值0.83 mm，沉降速度55.53m/h，氨氧化活性0.95mmol (NH⁺₄-N)/g(VS)·d。硝化颗粒污泥也具有厌氧氨氧化活性，氨氧化速率0.23mmol (NH⁺₄-N)/g(VS)·d，亚硝酸还原速率0.24mmol (NO^-₂-N)/g(VS)·d。

摘要:Cre重组酶来自噬菌体P1，可以识别特异的loxP位点的DNA序列，并进行专一性的剪切和拼接。利用PCR技术将cre基因克隆至原核表达载体pET-29a，在大肠杆菌BL21（DE3）得到了高效表达。采用DEAE-52柱层析的方法对表达蛋白进行了纯化。体外生物学活性检测表明，表达蛋白对含有同向loxP位点的质粒有切割活性。 

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摘要:酸菌是一类重要工业菌株。最近，乳酸菌遗传学和分子生物学的研究取得长足进步，导致发展了乳酸菌食品级基因表达系统。通过介绍乳酸菌食品级基因表达系统的基本要求、食品级选择性标记、食品级诱导物及该系统的研究进展，展示了乳酸菌食品级基因表达系统的建立对研究乳酸菌的基因表达调控和它的深层次的开发利用所具有的重要意义。

摘要:了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况，可以为研究生命活动过程提供重要信息。以差别筛选，扣除杂交等基本方法为出发点，研究基因表达差异的方法不断完善，先后出现了DDRT-PCR，RDA，SSH，cDNA微阵列(基因芯片)等技术。这里着重对这些方法的优缺点及改进进行了论述和评介，并对技术的发展趋势进行了分析。