摘要:G蛋白偶联信号传导系统是一类重要的细胞跨膜信号传导途径之一。在有关生化及药理的医学研究中发现许多药剂都是通过G蛋白偶联信号传导途径对动物起作用的。对G蛋白结构与功能的系统研究是新型药剂研制与开发的基础。G蛋白在物种进化过程中具有高度保守性，植物和昆虫中的G蛋白及其偶联组份研究将有助于明确作物抗病虫机理以及昆虫毒理。

摘要:显微注射技术本身固有的缺点在很大程度上限制了转基因动物的研究及应用。近年来，体细胞基因打靶和体细胞克隆的最新研究进展表明，这两种技术相结合将成为制备大型转基因动物的有效途径。

摘要:环境胁迫使植物细胞中积累大量的活性氧，从而导致蛋白质、膜脂、DNA及其它细胞组分的严重损伤。植物体内有效清除活性氧的保护机制分为酶促和非酶促两类。酶促脱毒系统包括超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)等。非酶类抗氧化剂包括抗坏血酸、谷胱甘肽、甘露醇和类黄酮。利用基因工程策略增加这些物质在植物体内的含量，从而获得耐逆转基因植物已取得一定的进展。

摘要:应用PCR方法，扩增人纤溶酶原cDNA基因中K4K5 cDNA片段，与酵母表达载体pPIC9K重组，获得表达质粒p9kkk18。该质粒转化毕赤酵母菌GS115，用G418YPD筛选高拷贝表型，PCR筛选K4K5 cDNA与酵母染色体整合形成的阳性克隆，阳性克隆用甲醇诱导表达。表达产物rK4K5分子量约215kD，占分泌总蛋白80%以上，产物浓度为150～250mg/L。初步纯化产物抑制牛毛细血管内皮(BCE)细胞增殖与鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成。

摘要:以分泌抗CD5单克隆抗体的杂交瘤细胞poly(A) mRNA为模板，通过RTPCR扩增出抗CD5单克隆抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL) cDNA片段组装出抗CD5单链抗体(ScFv) cDNA片段。该ScFv片段被克隆到pCANTAB 5E载体上，以E.coli TG1为宿主，进行噬菌体表面呈现。通过Molt4细胞表面分子CD抗原，对噬菌体表面呈现的ScFv进行免疫亲和富集筛选。经细胞ELISA鉴定，得到4株高亲和力克隆。DNA序列分析得知，单链抗体全长732碱基，其中VH为339碱基，VL为300碱基。抗CD5 ScFv在E.coli HB2151中以可溶形式分泌表达，产物主要分布于周质之中，占周质中总蛋白的20%。

摘要:用全长8.4kb的牛β-乳球蛋白基因(BLG)作为调控序列，用1.6kb的鸡溶菌酶MAR序列作为对抗转基因中位点效应的工具，构建了组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺表达载体。对2300枚卵进行显微注射，经PCR和Southern\|Blot检测，在170只出生小鼠中获得9只整合有牛BLG-tPA融合基因的转基因小鼠，并在转基因小鼠乳汁中检测到tPA的活性，tPA的表达水平最高达到12μg/mL。整合在小鼠基因组中的牛BLGtPA融合基因能稳定地遗传给子代。

摘要:VEGF(血管内皮细胞生长因子，Vascular Endothelial Growth Factor)是刺激内皮细胞增殖和新生血管形成的最重要因子，与多种实体瘤的生长和转移密切相关。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常有前景的课题。将VEGF受体KDR胞外区前三个Loop 969碱基对的cDNA片段克隆到杆状病毒表达载体pFastBacI,与杆状病毒表达载体Bacmid同源重组后，转染昆虫细胞SF9，获得重组杆状病毒并证明了目的基因的高效表达。经Western blot证实表达产物的特异性。经ELISA和体外生物学活性检测表明表达产物可阻断VEGF的生物学活性，抑制鸡胚CAM血管的生长。

摘要:轮状病毒是世界范围内引起婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体。VP7是轮状病毒的主要外壳蛋白和中和抗原，是发展基因工程疫苗的首选。把包含全部3个主要抗原性区域的轮状病毒SA11 VP7基因片段以谷胱甘肽S转移酶融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达，表达产物占菌体总蛋白的30%左右。经一步Glutathione Sepharose4B亲和纯化，重组蛋白纯度超过90%。Western blot实验表明，重组蛋白可被抗SA11的多抗特异地识别。动物实验表明，重组抗原可在小鼠和家兔体内诱导VP7特异的抗体和一定水平的SA11中和抗体。

摘要:研究了利用含D-氨基酸氧化酶(Damino acid oxidase, DAO EC1.4.3.3)的透性化三角酵母多倍体FA10(Trigonopsis variabilis FA10)细胞酶促转化头孢菌素(Ccephalosporin> C, CPC)为戊二酰-7-氨基头孢烷酸(Glutaryl-7-ACA,GL-7-ACA)的反应过程和细胞中同时存在的过氧化氢酶(Catalase, CAT)通过水解H₂O₂而对转化反应产生的干扰作用及其对策。实验证明适量添加外源H₂O₂(6%)或在反应体系中加入过氧化氢酶抑制剂NaN₃(0.13mg/mL)可使GL-7-ACA生成率分别为73.0%和70.1%。如果将透性化的FA10细胞在pH10.5～11.0，20℃条件下保温30min,CAT被不可逆性完全钝化，以无过氧化氢酶的FA10细胞进行CPC的酶促转化反应，GL-7ACA的生成率可达84%。

摘要:毕赤酵母是日益受到重视的基因工程受体菌，但是目前尚没有一种简便、高效的转化方法，也没有一种稳定、可靠的菌落PCR方法。本文通过在通常筛选重组子的MD培养基中增添1mol/L山梨糖醇使毕赤酵母电穿孔转化效率提高10倍以上。并比较系统地分析了其他影响电穿孔转化效率的因素，如毕赤酵母生长状况即OD600，不同的整合位点(BglⅡ,SacⅠ,SalⅠ,StuⅠ)，及不同的毕赤酵母受体菌(GS115和KM71)等。本文描述的转化方法所能达到的转化效率比目前大多数文献报道的效率要高，可使每微克质粒DNA产生的整合到受体菌染色体上的转化子述2800个；另外，我们经过一种冷热处理毕赤酵母菌落的方法使其细胞壁裂解，并改变通常PCR缓冲液的组成成分后，毕赤酵母菌落PCR方法几乎和大肠杆菌的操作一样简便可靠。借助本文所描述的电穿孔转化方法和菌落PCR方法，成功实现了水蛭素在毕赤酵母中的分泌表达，表达量为每毫升培养上清20μg，其生物活性达每毫升培养上清82个国际单位。

摘要:Δ⁶-脂肪酸脱氢酶是形成γ-亚麻酸的关键酶。从含有高山被孢霉Δ⁶-脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pTMACL6中，酶切出14kb的目的片段，亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0，在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYMAD6，用醋酸锂方法转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INCSc1中，在SC-Ura合成培养基中，选择得到酿酒酵母工程株YMAD6。在合适的培养基及培养条件下，加入外源底物亚油酸，经半乳糖诱导后，收集菌体。通过GC-MS对酵母工程株进行脂肪酸色谱分析，结果表明，产生了31.6%的γ-亚麻酸。这是迄今为止，国内外Δ⁶-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中表达量最高的报道。

摘要:以酒精酵母和热带假丝酵母为亲本，通过单亲灭活原生质体融合技术，获得了既具有糖化酶活性又能高产酒精的稳定的酵母融合株，并测定和比较了融合子的细胞大小、DNA含量以及比增长率μ、淀粉利用能力、乙醇耐受性、α-淀粉酶和糖化酶活力等生产性能。属间原生质体融合率为9.2×10^-6。F1和F5两株融合子性状较好，酒精发酵产量可达8.8%和11.5%，具有良好的应用前景。

摘要:为加强二恶英类化学物质的快速筛选和半定量检测，我们构建了一在二恶英反应增强子调控下的虫荧光素酶报告基因质粒。二恶英反应增强子来源于pHAV质粒，MMTV启动子来源于pCatM质粒，上述两者连接后与虫荧光素酶载体连接，转染人HepG2肝癌细胞，以2，3，7，8四氯代二苯并二恶英(TCDD)诱导报告基因表达后检测虫荧光素酶活性。结果表明该质粒中虫荧光素酶的表达受二恶英反应增强子的调控，且在一定浓度范围内虫荧光素酶的活性与TCDD的量呈线性关系。研究显示该质粒转染的细胞株有望用于快速筛选及半定量检测二恶英，可进一步加强研究作为二恶英类化学物质监测的常规方法。

摘要:将人Leptin表达质粒pBV220-OB转化E.coliJM109，经热诱导获得了目的蛋白的表达。经SDS-PAGE鉴定分析，表达产物以包涵体形式存在，目的蛋白表达量占菌体总蛋白的40%以上。通过包涵体分离，Sephacryl S200HR凝胶和DEAE52离子交换层析及Hypersil C18柱反相色谱纯化，获得纯度在95%以上，内毒素含量小于10EU/mg的高纯度的重组人Leptin。Western-blot鉴定表明，纯化表达产物能和抗Leptin抗体特异性结合；蛋白质N端15个氨基酸序列分析结果和预期的序列一致。纯化产物经复性处理，其分子中Cys96和Cys146形成二硫键。体内活性检测显示，纯化和复性的rh-Leptin明显抑制BALB/c小鼠的进食和体重增长，提示其具有明显的生物学活性。

摘要:反义RNA是反义技术的一个重要领域，为探索丙型肝炎病毒治疗新途径及验证转基因细胞模型HepG2.9706的有效性，设计了一条互补于HCV 5′NCR及翻译起始区(39713核苷酸)的反义RNA序列，将其插入pGL3载体SV40启动子下游，构建了HCV特异性的反义RNA真核表达载体(pHCV-asR)。通过PCR扩增、酶切反应及序列分析进行了初步鉴定，并将其转染HepG2细胞，通过RTPCR方法检测其在细胞中的表达并将pHCV-asR转染转基因细胞模型HepG2.9706，评价其对HCV 5′NCR的抑制活性。结果表明，构建的反义RNA表达载体插入序列正确，并能在HepG2细胞中表达；pHCV-asR在HepG2.9706中对HCV 5′NCR调控荧光素酶基因表达具有特异性的剂量依赖性抑制活性，最高抑制率可达57%。

摘要:以RT-PCR方法，从经丝裂原诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增出编码猪IFNγ的基因。经测序证实后插入载体pJLA503，并实现在大肠杆菌中的高表达。表达产物以包涵体形式存在，经7mol/L盐酸胍变性及精氨酸存在的情况下复性。再经DEAE-Sepharose离子交换柱、Sephdex-200凝胶过滤柱分离获得电泳单一纯猪IFN-γ蛋白，细胞病变抑制实验检测纯化产物有干扰素活性。

摘要:用响应面方法对Lactococcus lactis生产细菌素乳链菌肽的培养基进行了优化。首先用部分重复因子实验对培养基组份蔗糖，大豆蛋白胨，酵母粉，KH₂PO₄,NaCl,MgSO₄·7H2O对乳链菌肽的影响进行评价，并找出主要影响因子为大豆蛋白胨和磷酸二氢钾，前者为负影响，后者为正效应，其它组份对乳链菌肽产量的影响不显著。第二步用最陡爬坡路径逼近最大响应区域。最后用中心组合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度。菌株在优化培养基中的乳链菌肽产量增加1倍为2150(IU/mL)。动力学分析表明，菌株生长与细菌素的产生为部分耦联型，进入对数中期菌体比生长速率和细菌素比产率在优化培养基中均大于优化前培养基。

摘要:研究了厌氧氨氧化菌混培物的动力学特性。测得细胞产率系数1.573mgVS(mmol NH⁺₄)^-1；细胞衰减常数0.052mgVS(g·VS·d)^-1。厌氧氨氧化菌混培物的最大氨氧化速率1.320～2.761mmol(gVS·d)^-1，最大亚硝酸盐转化(反硝化)速率14.497mmol(gVS·d)^-1。厌氧氨氧化菌混培物利用氨的Km值1.801～4.215mmol·L^-1，利用亚硝酸盐的Km值0.468mmol·L^-1。氨自身的抑制常数38.018～98.465mmol·L^-1，实际最大氨氧化速率的氨浓度16.656mmol·L^-1。亚硝酸盐对厌氧氨氧化的抑制常数5.401～11.995mmol·L^-1。厌氧氨氧化的最适pH7.605。厌氧氨氧化的最适温度30℃。V_maxa、K_ma、K_ia和K_in的活化能依次为37.316、30.239、33.695和30473kJ·mol^-1。

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