田颖川 李太元 莽克强 韩一凡 李玲王学聘 卢孟柱 戴连韵 韩一依 严静君 Dean-x W.Gaberiel
1993, 9(4).
摘要:用带有35 S-Ω-Bt-NOS嵌合基因的双元载体的农杆菌LBA 4404转化欧洲黑杨的叶片外植体,共获得54株转化再生植株。用这些再生植株对杨尺蠖(Apcchimia cinerarius)进行毒力测定,昆虫校正死亡率在80一96%的再生植株占总测定植株的15%。部分再生植株对舞毒娥进行测定,表明在5~9天内校正死亡率高达100%,存活昆虫的生长和发育也明显地受到抑制。根据苗木在苗圃中高生长和昆虫校正死亡率采用重心聚类法进行分析,初步选出高生长良好和杀虫率居中的3株再生植株。以选出的植株为主进行了PCR及PCR产物的South—ern blot和再生植株DNA Southern blot测定,结果证明Bt基因已插入到这些植株的DNA上,并表达出苏云金杆菌杀虫蛋白的杀虫活性。
徐荻 蒋春雷<sub></sub> 石颖 虞建良 孙兰英 范佩芳 刘新垣
1993, 9(4).
摘要:用寡核苷酸诱导的基因定位突变法,将人白细胞介素-2C末端两亲性α螺旋中125位和127位残基分别或同时突变为Pro,并测定其生物活性和空间结构。结果发现所得突变体的生物学活性均急剧下降,同时α螺旋含量以及C端螺旋中残基的空间位置也发生了不同程度的变化。结果提示,C端α螺旋尤其是其疏水面的完整性对维持白介素-2的生物活性有重要作用。
1993, 9(4).
摘要:本研究构建了一系列乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的表达载体,其中HBsAg基因的启动区被小鼠金属硫蛋白启动子取代;而对HBsAg基因下游非编码区的几种基因元件则进行了不同的删除,并且添加异源基因调控元件。利用Hela细胞瞬时表达系统对各种构建物的表达水平进行分析。实验发现:除了必须取代HBsAg基因原有的启动子外,乙型肝炎病毒(HBv)增强子Ⅰ及其多聚腺苷酸化(poly A)信号对HBsAg在非肝脏细胞中表达也至关重要。但HBsAg的poIy A信号可用异源的poly A信号及猴空泡病毒(sV 40)T抗原基因的剪接信号取代。在HeLa细胞表达系统中,这种取代可进一步提高HBsAg的表达水平。反之,HBV增强子Ⅱ在HeLa细胞中对HBsAg基因的表达无显著作用。实验结果提示:除了已报道的HBV增强子Ⅰ能激活基因本身的启动子外,很可能还存在另外的功能,即对HBsAg转录体起稳定作用。
1993, 9(4).
摘要:钙调蛋白(Calmodulin)是生物细胞内一种重要的调控蛋白,通过其与靶酶的相互作用,控制细胞正常的生长和发育。我们以湖北光敏感核不育水稻cDNA第一条链为模板,参考大麦钙调蛋白基因序列合成5’端和3’端引物,利用多聚酶链式反应(PcR)合成了完整的水稻钙调蛋白cDNA,克隆并测定其序列。结果表明,光敏核不育水稻的钙调蛋白基因由450个桉苷酸组成,共编码148个氨基酸,且与迄今为止在植物领域里发表的大麦及苜蓿的钙调蛋白基因有很高的同源性。在核苷酸序列上与大麦有90%的同源性,与苜蓿有86%的同源性,其编码的148个氨基酸与大麦和苜蓿的差异分别只有1个。这是国际上第一次克隆水稻的钙调蛋白基因。
1993, 9(4).
摘要:采用体外培养的方法,研究斑马鱼卵母细胞的成熟过程。Ⅳ时相初级卵母细胞在o.5μg/m1 17a-羟基孕酮的EM-199培养液中,80%氧气,25℃的体外培养条件下,在40min内,胚泡(GV)逐渐由卵母细胞中央至动物极边缘l/2处移到动物极边缘,进八V时相卵母细胞。30min后胚泡破裂(GVBD),胚泡破裂率为59%。此种卵母细胞继续培养2h才完全成熟。成熟卵不能从滤泡膜中自然排出。冷开水中剥离其外边的滤泡膜后加入具有受精能力的精子,即能使成熟卵受精,受精膜举起,胚盘在动物极形成。其后受精卵的分裂、发育等与自然成熟受精卵相同。以发育至囊胚为受精标准,这种体外成熟卵受精率为78%。这是斑马鱼卵母细胞体外培养成熟的首例报道。鱼类卵母细胞体外成熟技术的建立,为外源基因卵母细胞胚泡内转移奠定了基础。
1993, 9(4).
摘要:应用转化脂(Lipofectin)介导转化技术成功地将含有潮霉素磷酸转移酶(Hygromycinphosphotransferase,Hpt)基因的E.Coli质粒pCGNl055导入到了小麦(徐州211)原生质体内,并由此获得了转化愈伤组织。根据Hpt抗性及DNA分子杂交证实转化频率高达6.O-8.8%,在分化培养基上转化愈伤组织再生出了白化植株,通过Southern杂交和酶活性检测证明外源Hpt基因存在于转化植株(白化苗)内,并进行了有效的表达。
1993, 9(4).
摘要:以乳酸发酵——溶剂萃取耦合过程为背景,研究了十二种有机溶剂在发酵培养基中的不同浓度水平,对德氏乳杆菌(LactobacilIus delbreuckii)生理活性的影响。根据乳杆菌生理活性随溶剂浓度变化的特征,将有机溶剂与乳杆菌的相容性分为四种类型,对比溶剂在水中溶解度与溶剂对乳杆菌特征毒性浓度的相对大小,对四种类型作了定性描述。
康风先<sub></sub> 叶勤<sub></sub> 俞俊棠 张嗣良
1993, 9(4).
摘要:通过大肠杆菌w 3110(pEc 901)和宿主菌w 3110的连续培养,分别得到它们的最大比生长速率、饱和常数、维持系数和生长得率系数。两者生长动力学参数的差异表明由于质粒pEC 90l的存在,明显使大肠杆菌的生长速率降低及维持代谢的消耗增大。W 3110(pEc901)的质粒稳定性和αA干扰素的表达均随比生长速率的增大而增大。在补料分批培养中,通过葡萄糖的流加维持w 311O(pWC 901)较高的比生长速率,培养13 h的干扰索效价达到2.5×10 10u/L,比摇瓶培养大为增加。
1993, 9(4).
摘要:培养基组成成分能影响人参培养细胞单细胞克隆的植板率。Ms培养基中2,4-D和KT需要一个适合的浓度比才能有效地促进细胞克隆的形成,其最佳浓度组合是2,4-D1.5mg/L和KT O.5mg/L。适合人参细胞克隆形成的NH4N03浓度是400mg/L,CaCl2.2H2O浓度是750mg/L。向培养基中补加适量的琥珀酸、精氨酸和维生素等都能明显提高植板率。通过优化培养基的组成成分,细胞克隆的植板率可增加到2.34倍。悬浮培养两周左右的细胞平板培养最有利克隆形成,当细胞植板密度低于4×103个细胞/ml时,几乎没有克隆形成。
1993, 9(4).
摘要:将双水相萃取同细胞破碎结合在一起,以水平搅拌式珠磨机为设备,以聚乙二醇和硫酸铵为成相体系,从酿酒酵母中以边破碎边萃取的方式提取醇脱氢酶。节省了萃取设备和时间,并利用双水相对蛋白质的保护作用提高了醇脱氢酶的活性。经过萃取破碎的酵母匀浆离心分相后,细胞碎片滞留在下相,90%以上的醇脱氢酶分配在上相,分配系数大于10,纯化倍数大于2。
1993, 9(4).
摘要:乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)经高压破壁后的粗提液,其β-半乳糖苷酶(E.C.3.2.1.23)比活力为5.56u/mg。经硫酸铵沉淀,丙酮沉淀,PAPMA—Sepharose 4B柱层析后,乳糖酶比活力达370u/mg,纯化了66.2倍,SDS—PAGE鉴定为一条带,分子量85000Da。酶作用的最适pH在6.4—6.8之间,最适温度40℃,50℃保温15min酶活丧失90%。以邻硝基苯一β一半乳糖苷(ONPG)为底物的米氏常数为2.78mmoI/L。酶的正常水解产物半乳糖对酶活力有一定的抑制作用,核糖强烈抑制酶活力,Fe2+、Zn2+、Cu2+、Ag+、PCMB和NBS都能使酶活丧失。Mg2+、Mn2+和还原剂巯基乙醇的存在能提高酶活力。
1993, 9(4).
摘要:猪胰岛素胰酶转肽成人胰岛素的相似条件下,基因工程生产的人胰岛素原可以50%的产率转成人胰岛素,所得人胰岛素的氨基酸组成与理论值相符,并具有天然活力。
1993, 9(4).
摘要:文对西洋参细胞在改良MS培养液中发酵过程和发酵动力学进行了研究。结果表明,细胞生长动力学为:dXdt=μmax·s Ksx,式中μmax=o.1613d-1,Ks=47.59g/L,基质消耗动力学为。-dsdt=1.75dXdt。西洋参细胞液体培养收获最佳期23天以上,皂甙累积的高峰期为25天以后。液体培养时,细胞中大部分皂甙释放到培养液中,经薄层层析后仅含Rg1;而愈伤组织中则含Rg1、Rb1、Re、Rd、Re五种,其总皂甙含量比人工栽种西洋参提高23%。
1993, 9(4).
摘要:本文研究了工业规模的批式洁霉素发酵过程中平衡生产期中有效的糖耗速率预测模型,在我国洁霉素批式发酵过程中首次设计并实现了流加补料的计算机系统。洁霉素产量可提高5%。
1993, 9(4).
摘要:针对笼式通气搅拌生物反应器的特点,本文提出了一种简单可信的测量丝网内外液体交换速率的实验方法,根据此方法,在CellCul-20 A生物反应器中得出了通过丝网的液体交换速率关联式: 单层丝网:Qs=1.93×1O-5N1.81+1.13×10-4UG0.61(Ⅰ) 双层丝网:Qs=3.42×10-5N1.49+1.46×10-4UG 0.68 (Ⅱ)并在此基础上,建立了台适的深层通气的氧传递模型,得到: 1- 1- 1- (KLa)d.Vc Qs + Vb.[(KLa)b-(KLa)d](Ⅲ)理论分析和实验结果表明,增大丝网内的液体体积和提高丝网内的氧传递速率,可以有效地提高反应器的体积氧传递系数。
1993, 9(4).
摘要:在1.8L气升式发酵反应器中,研究了金针菇菌丝体深层培养工艺条件及其特性。结果表明:金针菇菌丝体深层培养可采用玉米、黄豆和糖蜜等廉价原料作主要碳氮源;最适需氧量为1.0—2.0×10-7mol O2/ml·min·atm,培养24—72h内,菌丝球生长遵循立方根规律·即x1/3,=0.786+0.027t。在最佳发酵条件下,摇瓶培养4天,茵丝干重达24.4mg/ml在反应器培养4天,菌丝干重为25.7mg/ml。
1993, 9(4).
摘要:采用圆盘式固态发酵器生产单细胞蛋白(SCP)。发酵器有机械化上料、搅拌、补料、出料装置和自动调节温度、湿度、通风系统,单机日产量1吨。用SC85;和ST851,酵母以淀粉质原料,固态培养24h,产品粗蛋白含量由15.7%增加至40.50%以上(以干物质计),蛋氨酸含量接近鱼粉。该工艺培养条件稳定,产品质量可靠。表明圆盘式固态发酵器是一种性能良好的发酵器。
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