1988, 4(4).
摘要:将小鼠金属硫蛋白I(MT—I)启动子置换人生长激素(hGH)基因的启动子,构建成MT—hGH嵌合基因。当与疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因(tk)的质粒共转染小鼠L—tk-细胞,在tk+转化细胞中所整合的MT-hGH基因可被重金属镉诱导。获得可表达和分泌hGH的细胞株,其中一株hGH的产率为2.5μg/106细胞/24h.所产生的hGH分子量为22000道尔顿,表明小鼠L一tk+细胞株能对外源hGH基因所产生的mRNA进行正确的加工并能删除激素原的信号肽。
1988, 4(4).
摘要:将热稳定肠毒素I(ST I)基因的SfaNI—Fnu4HI的限制性片段经进一步加工,插入到 一个“open reading frame”载体的合适位点中,形成一个阅读框架正确的ompF—est—lacz杂种结构基因。该杂种基因在ompF启动子的控制之下,产生一种具有β-半乳糖苷酶活性的杂种融合蛋白。我们获得了一些具有酶活性、DNA杂交阳性的转化子。对其中一个,TKl046(pPH 14),作了进一步研究。经限制性内切酶分析和DNA序列分析,证明STII基因在重组DNA中连接方向是正确的,其连接处的碱基排列序列。STII基因及其相对于1acZ的阅读框架也是正确的。我们还纯化了该重组体表达的融合蛋白,并获得了高滴度的抗融合蛋白抗体。动物实验结果表明,该抗体能显著中和天然STII肠毒素的毒性作用。
1988, 4(4).
摘要:豆根瘤菌(Rhizobium phaseoli)共生质粒pSYM3622具有诱导宿主植物(phaseolusvulgaris cv."Jamapa")结瘤固氮的有效基因,以及菜豆根瘤菌特征性的产黑素基因(Melanin production gene)。在诱动因子RP4的存在下,共生质粒能够有效地向三叶草根瘤菌和农杆菌转移。种间和属间杂交子都能诱导菜豆植物形成无效根瘤,并且具备在特定培养基上产生黑素的能力。pSYM3622在三叶草根瘤菌菌株RCR226中具有明显的不亲和性,但是在农杆菌杂交子中,这些结癌和产生黑素的特征在植物根瘤分离菌中能够稳定地保持下去。试验同时研究了pSYM3622向假单胞菌和大肠杆菌的诱动转移。
1988, 4(4).
摘要:以B.subtilis质粒pUB110为基础构建了双标记(Km2、cm2),多酶切点接头的表达质粒pNQl22和pNQll3系列。pNQl22的分子量为3.2×106道尔顿,其对cm抗性水平和cat-86基因表达水平与质粒pPL600相同,pNQll3系列质粒分子量为3.1—4.1×10。道尔顿。其对cm抗性水平高于质粒pPL600,它们所携带的cat-86基因的表达水平无论在非诱导和诱导条件下部比pPL600高约5倍。无分解代谢阻遏现象,传代稳定,因而可以用作Bacillus属基因工程的载体。
1988, 4(4).
摘要:酵母SUC2基因克隆YFD6的DNA用核酸酶BAL31从SUC2基因的BamHI切点进行酶解,加上BamHI接头后,自连环化,得到的一个缺失质粒YFD6A21保留sucz基因动子-信号顺序以及氨基端22个氨基酸残基的编码顺序。将带有HBsAg基因的BamHI片段插入YFD6 A21的BamHI切点,使HBsAg基因suc2基因融合,然后将重担质粒引入酵母将酵母转化子在葡萄糖阻遏及去阻遏条件下生长,然后测定细胞内、周质空间和培养基中的HBsAg量。我们只能在葡萄糖去阻遏条件下检测到HBsAg的表达,几乎全部表达的HBsAg位于细胞内。
1988, 4(4).
摘要:采用固相亚磷酸三酯法化学合成生长抑制激素基因的两个DNA片段As2,A23,退火聚合成平端双链后,插入到经Smal酶切的pUCl2质粒DNA中。通过抗性筛选,正性标记筛选以及酶切位点分析,分子杂交,序列分析,证实化学合成的生长抑制激素基因已在大肠杆菌JM83中无性繁殖。
1988, 4(4).
摘要:本文提出了一种新的细胞融合方法——激光诱导细胞融合,并以泥鳅受精卵为材料进行了细胞融合实验,获得成功。激光融合的突出优点是无毒,无损伤,融合后成活率高。实验中融合的泥鳅卵大都能继续卵裂发育,有的经卵裂、囊胚、原肠到器官形成.直至幼体。
1988, 4(4).
摘要:以福堤霉素产生菌——小单孢菌(Micromonospora)sp.SIPl4812为材料进行的研究表明,0.05%以上甘氨酸能抑制它的孢子发芽,适当培养的菌丝体在含有消色肽酶和溶菌酶的溶菌系统中可分离原生质体达109/ml以上,该菌的原生质体在营养成分相对贫乏的高氏一号合成培养基(补充高渗剂)上再生,再生频率可达5%以上。再生菌落的产量分布较自然分离分散,其中一株达到原株生产能力的280%。
1988, 4(4).
摘要:对β-硫酸酯乙飘基苯胺(SESA)与环氧氯丙烷交联琼脂糖反应,制得对氨基苯砜乙基(ABSE)交联琼脂糖,经重氯化后与β-淀粉酶偶联制成固定化酶。研究了载体的苯胺基含量、PH)、巯基乙醇等因素对酶偶联反应的影响。尤其是巯基乙醇的存在,可使固定化酶活力明显提高。固定化酶活力可达120u/ml,活力回收为38%,相对活力为45%。固定化β-淀粉酶的最适pH和最遗温度与自然酶相似,以可溶性淀粉为底物时,固定化酶的米氏常数是自然酶(Km=0.0057(%))的8倍。将固定化酶装柱,连续水解可溶性淀粉,在45℃下连续操作;50天后,酶活力未见下降,在50℃下28天后,还保留活力50%左右。
1988, 4(4).
摘要:本文以多种无机材料和合成树脂为载体对己酸菌进行了固定化研究。发现吸附树脂、粒状焦渣、M8载体等吸附材料对已酸菌有较好的固定化效率和较高的产酸率,以硅铝酸盐为主体的M8载体物表现出独特的优越性,它可以使已酸菌的产酸期缩短78%;产酸率提高50~90%。还发现钕、铒、钬、镱、镝等稀有金属离子都不同程度地增加了已酸产量;而钴、镍等金属离子却使发酵体系的产酸量大大下降。
1988, 4(4).
摘要:用多元回归法定量分析了绿色木霉Trichoderma ciride 纤维素酶系的三类组分及其协同效应在纤维索粉酶解中的作用。结果表明,纤维素的溶解由CBH组分和EG组分的协同作用所决定,任一单一组分或其它组分间协同作用的效应都很微弱。而还原糖的生成则主要是在此基础上由纤维二糖酶所促进的。当纤维素粉分解近70%时,x光衍射分析表明,其无定形区酶解73.6%,结晶区酶解66.6%,两者几乎同时被分解。由此,提出了一个同时测定纤维素酶系的纤维溶解活力和糖化活力的方法。
1988, 4(4).
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