1987, 3(2).
摘要:用简单而高效的“缺口双链DNA”的定向点突变方法,将IFN-β结构基因编码17位cys的密码TGT改成编码ser的AGT。变异株用合成的诱变引物作为探针来筛选,由Hinf I酶切电泳图谱分析及DNA顺序的测定得到证实。变异率为11%。在大肠杆菌表达的lFN-βser17的抗病毒活力明显高于在相同宿主菌中表达的lFN-β的抗病毒活力。
1987, 3(2).
摘要:本工作采用了快速、简便的方法从大量培养的基因工程菌E.coil 1548(pHK99)表面分离和纯化了K99抗原蛋白,纯化产物在SDS-PAGE上呈现-条蛋白带,该蛋白的分子量约为16500,PAS反应结果表明该蛋白为糖最白,等电聚焦证实该蛋白pI为9.5,用免疫学方法证实了该蛋白大量存在于细菌表面,并具有较好的热稳定性,文中还讨论了该蛋白在不同培养基中的表达。
1987, 3(2).
摘要:用我室克隆的含大肠杆菌K88ac抗原基因的pMM031质粒和含肠毒素LT(A-B+)抗原基因的质粒pPMc4,使用限制性内切酶BamHI酶解,取得了K88ac抗原基因的片段,再经和BamH I消化的质粒pPmc4连接重组,构建了同时具有这两种抗原基因的质粒pMM085羟琼脂糖凝胶电泳分析,pMM085质粒的分子量约为14.6Md,在宿主菌E.CoilC600,经过ELISA和反向间接血凝等几种试验测定K88ac抗原,结果都说明其抗原产量与亲本菌株基本相同。重组菌的抗甘露糖豚鼠红细胞凝集反应也是阳性。对肠毒素抗原用被动溶血试验测定,结果说明其LT-B的产量和亲本菌的产量也基本相同。重组的工程菌株经兔肠结扎试验表明没有毒性反应,因此重组菌株可以作为预防仔猪腹泻的活菌疫苗候选株。
1987, 3(2).
摘要:从13日龄的胡萝卜Woolc细胞株培养物分离PolyA+mRNA,按Leonard程序合成双链cDNA,将cDNA甲基化、末端变平,并与EcoR I接头连接之后再与λgtll DNA连接构成重组DNA分子,经离体包装,构建得到一个复杂度为1.5×106的cDNA文库。组织特异的cDNA克隆用与胚胎组织抗原特异反应的多克隆抗体进行筛选得到。
1987, 3(2).
摘要:在含0.3%甘氨酸的液体培养基中培养庆大霉素产生菌——棘孢小单孢菌,其菌丝形态有明显的改变,易被溶菌酶消化细胞壁而释放大量原生质体。菌丝的培养龄影响其相应原生质体的再生活性(即再生成菌落的能力)。以72h为最佳,48及120h菌龄的原生质体再生频率依次相当于72h的40%和10%左右。以PEG4000为融合剂。用直接法检出重组子,重组频率约为10~6,融合重组子中有一些菌株庆大霉素的摇瓶发酵效价在1900u/m1左右,比对照菌株有很大的提高。
1987, 3(2).
摘要:本文报道了酒精生产菌株K氏酿酒酵母Sacchormyces cerevisiae var.ellipsoideus的HUK-1(his-,二倍体,但在我们所试的5种产孢培养基上均不产孢)与糖化酵母Sac—charomyces diastaticus 7c(arg-,a)的种间原生质体融合,其营养标记互补的融合频率约是2.07×10-6—3.40×10-5。这些融合子曾在选择培养基MMs或Mmo上连续传代10次,以促进两亲核的融合。融合子的酒精发酵特性,细胞形态、体积大小、DNA含量、繁殖速率、发酵强度以及产孢能力等方面的观察和测定结果表明,均不同于双亲菌株。用显微操作器解剖了个别原养型融台子HU—KDF—185的4孢子子囊,在获得的93个单孢株中,其淀粉发酵特性和遗传标记均有双亲类型的分离或重组现象。上述实验结果充分证明了不同倍性的酵母之间可以通过原生质体融合获得种间杂种。
1987, 3(2).
摘要:本文报道了用聚乙二醇(PEG)方法,将农抗5102产生菌的两株不同营养缺陷型突变体WNF-2-l-135(afg-leu+)的原生质体和WNF-2-1-90(1eu-arg+)的原生质体进行融合,在再生培养基上再生细胞壁并获得稳定的原养型融合子。经测定,其中三个融合子(FR-001,FR—005和FR-008)在营养特性、菌体形态和培养特征等方面与两个亲本都有一定差别,在抗菌活性方面,FR-001菌杆和FR-005菌杆具有两个亲本菌株所能产生的三种抗生素,即5102-1号、5102-2号和5102-3号抗生素,FR-008菌株只能产生5102-1号和5102-2号抗生素,而不能产生5102-3号抗生素。融合子所产生的这些抗生素的活性大多比原始出发菌体和亲本要强。除此以外,三个融合子还都能产生两个亲本所没有的对酿酒酵母具有活性的抗生素,而且这种抗生素的性质,三个融合子也都各不相同。
1987, 3(2).
摘要:在正常条件下,烟草Hyp抗性变异系愈伤组织内的游离脯氨酸含量是其野生型的4倍多。这种积累游离脯氨酸的特性在愈伤组织的转代、再生及次生过程中均十分稳定。虽然其他多种氨基酸含量也有所改变,但变异系内游离脯氨酸的积累具有特异性。由于脯氨酸对Hyp抑制效应具有部分的逆转作用,所以游离脯氨酸的积累是变异系抗Hyp抑制作用的重要原因。然而,变异系内蛋白质组成中的脯氨酸并没有特异性地增加。在Hyp存在条件下,变异系内的硝酸还原酶、转化酶及过氧化氢酶活性均显著地高于野生型。表明变异系对培养基中的碳源和氮源具有较高的利用能力。
1987, 3(2).
摘要:本文报道不同载体固定化酵母的某些代谢行为和细胞形态。观察到以海藻酸钙凝胶固定酵母,其发酵液总挥发酸量、乙酸量分别比自然细胞减少25.8%和50.O%,而丁二酸量高出自然细胞36.5%。以海藻酸钙,聚乙烯醇凝胶固定酵母,其氨基氮的利用率比自然细胞分别提高31.1%和34.1%,在固定化前后、酵母菌对各种a-氨基酸的利用速度亦都发生明显的变化。电镜观察,酿酒酵母的细胞膜内陷、形成“凹池”。
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