粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体α链（GM-CSFRα）的克隆与表达

摘要:

ＧＭ-ＣＳＦ高亲和力受体至少由两条链组成，低亲和力的α链及无结合力活性的β链。本文采用ＲＴ-ＰＣＲ的方法，从ＧＭ-ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ-１中克隆了全长的ＧＭ-ＣＳＦＲα链Ｃｄｎａ（包括信号肽部分），经酶切及全基因测序鉴定，并分别在原核及真核细胞表达系统中表达。在大肠杆菌中ＧＭ-ＣＳＦＲα以ＧＳＴ融合蛋白形式表达，谷胱甘肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化融合蛋白。ＧＳＴＣＳＦＲαＣ无受体活性，推测主要与缺乏翻译后修饰有关。将全基因克隆入真核表达载体Ｐｓｖｌ中，转染ＣＯＳ-７细胞瞬时表达以重建ＧＭ-ＣＳＦ的低亲和力受体，１２５ＩＧＭ-ＣＳＦ平衡结合实验证明转染后的ＣＯＳ-７细胞膜上有受体的表达，Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ显示表达的受体α链分子量略低于ＴＦ-１细胞。胞外区基因（ＣＳＦＲαＢ）克隆入Ｐｓｖｌ构建的Ｐｓｖｌ／ＣＳＦＲαＢ表达载体，转染ＣＯＳ-７细胞后，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达细胞上清，有单一的反应带，表达上清有ＧＭ-ＣＳＦ的受体活性。

Abstract: