大肠杆菌mtlD基因和gutD基因的克隆、全序列测定和高效表达

摘要:

使用指示性培养基，筛选含有正常甘露醇操纵子和山梨醇操纵子的大肠杆菌菌株。从细菌染色体DNA中，通过多聚酶链式反应(PcR)扩增出1一磷酸甘露醇脱氢酶基因(mtlD)和6一磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD)。将它们分别克隆至载体pBluescript sK或Ks以后，完成了这两个基因DNA的全序列分析。序列测定结果表明：所克隆的mtlD基因除编码区第96位密码子由GCA变成了GCT之外，其它序列与所报道的修正序列一致；所克隆的gutD基因除3＇端非编码区缺失一个碱基C之外，基因全序列与文献报道一致。完成此两个基因的大肠杆菌高效表达载体的构建之后，表达的1－磷酸甘露醇脱氢酶和6－磷酸山梨醇脱氢酶分别占菌体可溶性蛋白的24．79%和29．38％。

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