酿酒酵母超氧物歧化酶(SOD)基因的克隆和表达

摘要:

通过PCR扩增技术从酿酒酵母中得到了Cu，zn—SOD的结构基因，此基因被亚克隆到大肠杆菌质粒载体pT7—7．得到重组质粒pT7－7：SOD。利用EcoRI和Pstl酶切pT7-7::SOD质粒．经琼脂糖凝腔电泳，DEAE-滤膜回收Cu。zn—SOD结构基因片段，将其亚克隆到M13中．并转化大肠杆菌，得到了重组质粒M13-::t SOD，酶切和纯化后的SOD基因，定向克隆到酵母质粒载体pHz－8的smal和EcoRI位点上，构建成重组质粒pHZ－8－l。经转化酵母受体菌ZH-l和DP—l后得到了转化子．来自于ZH—l的转化子在非选择性条件下培养40世代后仍有95％以上细胞保留重组质粒。而来自于DP-1的转化子很不稳定。经蛋白提取、聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶活性测定结果表明，来自于zH－1转化子中SOD的表达量约为细胞可溶性蛋白的15％．并具有生物活性。

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