抗人PAI－1单克隆抗体制备、鉴定和应用

摘要:

以重组PAI－（rPAI－1)为抗原，通过杂交瘤技术获得6株阳性杂交瘤细胞(Apl、AP2、AP3、AP4、AP5和AP6)，并用SPA亲和层析纯化了抗Pal－1单克隆抗体(McAb)。所有McAb均能识别rPAI和天然PAI－1，腹水滴度均为10 6以上。6种McAb对PAI－1亲和常数在3．45×10⁷--1.05×10⁹mol／L之间。AP2、AP3McAb能完全抑制PAI－1活性，AP4、AP和AP6只能部分抑制PAI－1活性，Apl则不抑制PAI-1活性。6种McAb中只有Apl、AP4和AP5能识别Pal－1／t－PA复合物。利用Apl、AP3、和AP4 McAb制备免疫亲和柱一步纯化HepG2细胞分泌的PAI－1，纯度大于98％，回收率92％，纯化倍数51倍。利用抗PAI－1 McAb建立了夹心法ELISA，测定了人血浆PAI－1水平，正常人血浆PAI－1平均含量(X士D)为24．7±7．75ng／ml。

Abstract: