凝乳酶原mRNA的分离及其cDNA克隆的鉴定

摘要:

用异硫氰酸胍法从牛胃粘膜组织中分离到poly(A)RNA。经电泳分析、体外翻译活性分析及No rIhern转移杂交分析，结果表明，poly(A)RNA中含有完整的，具有生物活性的凝乳酶原mRNA，大小为16S。从poly(A)RNA建立的cDNA库中，以C500-pepsinogen为探针进行初级筛选，集中阳性克隆成为凝乳酶原和相关胃蛋白酶原cDNA富集库。从寓集库中选出插入片段带有凝乳酶原基因所特有的EcoRI切点的19个克隆。经限制性内切酶谱分析确定pcT 5为凝乳酶原基因克隆，其5’端缺少80bP。以pCT 5的插入片段为探针，从cDNA库中进一步筛选得到pCTl5。酶谱分析表明，pcTl5的两端均足以覆盖编码区域，而在917位左右约有110bP的缺失。从而不仅充分证明了分离的poly(A)RNA中含有全链长的凝乳酶原mRNA，而且还可通过拼接pCT5及pCTl5获得完整的凝乳酶原基因。

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