D-泛解酸内酯水解酶的定向进化

摘要:

易错PCR结合DNA改组方法向D-泛解酸内酯水解酶基因中引入突变，并构建突变体库。利用酶的催化特点和产物特性建立了基于平板初筛和高效液相复筛的两步法D-泛解酸内酯水解酶活性筛选系统。用该筛选系统以酶活力和pH稳定性为指标对突变体库进行筛选，最终获得一株酶活力高且在低pH条件下稳定性好的突变体Mut E-861。该突变体的酶活力是野生型酶的5.5倍。对突变体和野生型酶在pH 6.0和pH 5.0条件下的残余酶活进行对比，在这两种pH条件下，突变体酶的酶活残留分别为75%和50%，而野生型酶只能保持原来的40%和20%。通过软件对突变体Mut E-861酶基因和野生型酶基因进行分析对比，发现突变体Mut E-861酶基因发生了三处点突变，其中突变使两处氨基酸取代，另一处为沉默突变，未引起氨基酸的变化。

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