抗人CD19单链抗体基因的构建、表达及功能测定

摘要:

采用RT-PCR方法从分泌抗人类白细胞表面分化抗原CD19单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆出V_H和V_L可变区基因，再通过重叠延伸拼接（spliceoverlap extension）PCR方法在V_H和V_L可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人CD19单链抗体（抗CD19-ScFv）基因。将其克隆至表达载体PET28a并在大肠杆菌中表达。SDS-PAGE和Westernblot分析结果表明，抗CD19-ScFv在BL21（DE3）菌中获得表达，重组蛋白的相对分子量为27kD，表达产物以不溶性包涵体形式存在，经过溶解包涵体，镍柱亲和层析纯化和体外复性过程，获得了高纯度的单链抗体片段。流式细胞分析结果证实抗CD19ScFv可与人类白细胞表面的分化抗原CD19结合，保留了鼠源性单抗与CD19结合活性。抗人CD19-ScFv的构建与表达，为下一步针对B淋巴系统恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础。

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