将粪产碱杆菌青霉素G酰化酶基因构建重组表达质粒pKKFPGA ,pKKFPGA再转化宿主菌DH5α,所得重组菌不需诱导便能高效表达青霉素G酰化酶 ,表达量达 2590u L ,比野生型粪产碱杆菌表达量高432倍 ,其菌体比活力达300 (u L) A600。菌体破碎后的上清液经DEAE-SepharoseCL 6B离子交换层析和Butyl-SepharoseCL 4B疏水层析 ,即可得纯度提高 20倍、比活为 686u mg的青霉素G酰化酶 ,两步纯化的总收率达 91%。Western印迹分析表明5%的原前体青霉素酰化酶在胞内形成了包涵体 ,说明其成熟的限速步骤在胞内的运输阶段.
杨志建; 蔡谨; 孙健; 袁中一;. 粪产碱杆菌青霉素G酰化酶在大肠杆菌中组成型表达及分离纯化[J]. 生物工程学报, 2004, 20(5):
通信地址：中国科学院微生物研究所 邮编：100101
电话：010-64807509 E-mail：cjb@im.ac.cn
