水泡性口炎病毒核蛋白基因的表达及初步应用

摘要:

将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中，构建N基因克隆重组质粒，进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD/Thio TOPO表达载体，经PCR限制性内切酶分析、测序鉴定，筛选获得N基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆，成功构建了水泡性口炎病毒N基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达，可稳定、高效地表达N蛋白抗原。SDS-PAGE、Western blotting及间接ELISA试验结果表明，表达蛋白为融合蛋白，质量约63.5 kD，其表达产量约占菌体总蛋白的16％，相当于92mg/L。融合蛋白中含有水泡性口炎病毒群特异性的核蛋白抗原，应用表达的VSV核蛋白抗原建立了酶联免疫吸附试验，通过对186份山羊、豚鼠实验动物人工感染VSV的血清样品和参考血清样品的检测，并与微量血清中和试验进行了比较，结果表明：以表达的VSV核蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验是一种特异性强、敏感性高、快速、简单、安全的检测方法，抗原制备成本低。

Abstract: