构建了重组双功能水蛭素 ( Recombinant-RGD-Hirudin、 r-RGD-Hirudin ) cDNA 的表达质粒 RGD-Hirudin-pPIC9K，转化入毕赤酵母中，经筛选得到高表达的阳性克隆。种子菌经过3d发酵培养，其培养液上清经超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析后，得到纯度大于97%、比活性为 12000 ATU/mg 的 r-RGD-Hirudin，回收率大于60%，发酵产率为 1 g/L。纯化后的 r-RGD-Hirudin 经过还原SDS-PAGE，抗凝血酶活力分析、抗血小板聚集分析、质谱分析及等电聚焦分析等方法鉴定，证明该表达产物为水蛭素的衍生物，具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重功能。
莫炜 张艳玲 王龙生 杨新英 宋后燕. 重组双功能水蛭素的发酵、纯化和鉴定[J]. 生物工程学报, 2004, 20(1):
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