摘要:对重组人核苷二磷酸激酶A（rhNDPK-A）进行纯化，并对重组产物的理化性质及在溶液中的聚合状态进行鉴定。NDPK-A工程菌发酵后的菌体高压匀浆，然后微孔过滤、超滤浓缩，所得样品经DEAE阴离子交换、Cibacron Blue亲和层析、分子筛层析三步纯化后，以SDS-PAGE和RP-HPLC分析纯化产物的纯度，RP-HPLC测定酶活性。合格制品以基质辅助激光解析飞行时间质谱测定相对分子质量（MW）；Edman降解法测定N末端序列；多角度激光散射法测定重组产物在溶液中的表观分子量。结果表明，rhNDPK-A纯化产物的SDS-PAGE纯度为97.3%，RP-HPLC纯度为99.2%；比活性为（900±100）u/mg；单体相对分子质量为17017，与NDPKA分子量理论值相差132。测序结果表明，rhNDPK-A N末端缺失Met残基，其理论分子量为17017，与飞行质谱测定结果完全一致。表观分子量测定结果表明，rhNDPK-A在溶液中形成六聚体，表观分子量为102kD。上述结果说明， NDPK-A重组产物具与天然产物相同的自发形成六聚体性质，这为NDPK-A新药开发和机理研究打下了良好基础。
