鼻咽癌组织cDNA文库的构建及抗原基因的筛选

摘要:

构建人鼻咽癌组织cDNA文库，以SEREX方法从cDNA文库中筛选鼻咽癌抗原基因。采用确诊鼻咽癌患者新鲜活检癌组织构建cDNA文库，测定原始文库滴度，进行蓝白筛选以确定文库的重组率。以建库组织来源患者的自身血清，采用“一对一” 的血清学方法筛选所构建的cDNA文库，阳性克隆经PCR检测鉴定后进行序列分析。经测定原始文库滴度为7.28×10⁶pfu/mL,含3.64×10⁶个重组子，重组率为94%，扩增文库滴度为3.8×10⁹pfu/mL,cDNA插入片段大小在0.5～3.0kb之间。文库经三轮血清学筛选共获得23个阳性克隆，分别代表了16个独立的cDNA插入片段（抗原基因）。其中10个与已知基因高度同源，另外6个基因与GenBank中已知基因的部分同源，其中有3个是新基因。利用SMART技术构建了高质量的人鼻咽癌组织cDNA表达文库，有利于以cDNA文库为基础的进一步的实验研究。应用SEREX技术初步筛选鼻咽癌组织cDNA文库，共得到16个鼻咽癌相关抗原基因，其中有3个是新基因，可能为鼻咽癌的免疫学研究提供新的研究分子。

Abstract: