摘要:在大肠杆菌磷酸转移酶系统中，葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCBGlc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株，有望降低葡萄糖的摄取速率，减少乙酸累积，促进菌体生长。运用PCR技术，扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源，中间为氯霉素抗性基因的DNA片段。经电转化，将外源DNA片段分别转入Escherichia coli DH5α、JM109中。在Red重组酶的作用下，外源DNA片段与染色体上同源区域重组，将基因ptsG敲除，构建ptsG基因缺陷株DH5αP、JM109P。在LB培养基中，ptsG基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异。在含有葡萄糖的LB培养基中，DH5αP、JM109P的最高菌密度分别是对照菌株DH5α、JM109的3.47倍和4.25倍，ptsG基因缺陷株对葡萄糖的摄入量也明显高于对照菌株。重组蛋白肿瘤坏死因子（TNF）在DH5αP、JM109P中的表达量分别占全菌蛋白的24.3%、20.8%，A600分别为8.28、7.62，TNF在缺陷株中单位体积的表达量明显高于对照菌株。以上结果说明，大肠杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和表达外源蛋白的能力，在大肠杆菌高密度发酵研究方面具有良好的应用前景。
