用绿色荧光蛋白监测转基因植物中选择标记基因的消除

摘要:

绿色荧光蛋白(GFP)可直接进行活体观察，它的这个优点可被用于监测转基因植物中选择标记基因的消除。为此，构建了植物表达载体pGNG，将绿色荧光蛋白基因(gfp)和卡那霉素抗性基因表达盒(NosP-nptll-NosT)一起克隆在两个同向的lox位点间，在第一个lox位点上游置有CaMV 35S启动子以驱动GFP表达，第二个lox位点下游置有不含启动子的大肠杆菌β-葡萄糖醛酸酶(GUS)基因。首先在含卡那霉素(Kan)的培养基上筛选出转pGNG的烟草，借助绿色荧光可容易地检出表达GFP的转化体。然后用另一转化载体pCambia1300Cre二次转化表达GFP的转基因植物，利用另一选择标记基因潮霉素抗性基因(hpt)进行筛选，在获得的再生植株中，Cre重组酶的表达消除了转化体中两lox位点间的gfp和nptll。实验结果表明可借助GFP荧光的消失，快速选出nptII被消除的二次转化体，同时GUS(作为目的蛋白) 在CaMV 35S启动子驱动下获得表达。最后利用后代的分离将hpt和cre除去。

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