利用同源重组建立地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的基因置换/中断系统

摘要:

地中海拟无枝菌酸菌U32是力复霉素SV的工业产生菌，其遗传操作一直是一个难题。在该菌株DNA高效电转化的基础上，利用同源重组的原理，建立了地中海拟无枝菌酸菌染色体的基因置换/中断系统。通过大肠杆菌重组质粒pDK110构建、转化及两步重组筛选，成功地用α淀粉酶基因（amy）取代了地中海拟无枝菌酸菌U32染色体上的3-氨基-5-羟基苯甲酸合成酶基因（ahbas）。第一步单交换和第二步双交换的频率分别是0.5%～0.7% 和 2%。将质粒pDK110变性后转化可显著提高重组频率，在第二步筛选双交换前对单交换重组子进行电击也能够提高其双交换重组的频率。此外，通过转化构建的两端带同源区段的线性DNA片段及一步重组筛选，我们在地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的amrD,rifO基因中间插入了阿普拉霉素抗性基因（apr），其效率约为30～50转化子/μgDNA。

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