TPO模拟肽与人IgG1 Fc片段的融合表达及其生物学特性研究

摘要:

依据本室获得的人TPO模拟肽序列，合成了该模拟肽的DNA序列，分别连接至4种不同长度的人IgG1 Fc基因片段的5′端，并克隆至质粒表达载体pET28a(+)，转化大肠杆菌BL21(DE3)，筛选获得了4种重组工程菌，其中3种分别高效表达了3种不同长度的融合蛋白，而第4种工程菌未表达。表达的3种融合蛋白的分子量分别约为28kD、12kD和12kD，表达量约占菌体蛋白总量的30%左右，纯化获得了3种TPO模拟肽融合蛋白。3种融合蛋白均有较好的体外活性，维持TPO依赖细胞Ba/F3-mp1生长的EC50分别为：13、10、10 nmol/L。用血小板减少症小鼠动物模型，测定了它们的体内活性，3种融合蛋白均有升高血小板和缩短血小板恢复时间的功能，分别比TPO模拟肽活性提高了18、8、8倍；而对白细胞及红细胞无显著影响。分别用3种融合蛋白免疫BALB/c小鼠，均未刺激小鼠产生抗TPO模拟肽抗体，并显示了较好的应用潜力。 

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