人内皮抑素在毕赤酵母中的表达、纯化与生物功能研究

摘要:

内皮抑素（Endostatin）是近年来新发现的一种内源性新生血管生成（Angiogenesis）抑制因子，通过抑制新血管生成而抑制肿瘤的形成和转移且不会引起耐药性，具有极高的临床应用前景。巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris)具有表达率高、产物可分泌、可对高等真核生物蛋白正确进行翻译后加工、遗传稳定、发酵工艺成熟等优点被用来进行重组人Endostatin的表达。本研究用PCR的方法从人胎肝cDNA文库中扩增出人Endostatin的cDNA，测序正确后转入毕赤巴斯德甲醇酵母，并获得了高效可溶型表达，用肝素亲和层析的方法进行纯化，纯化后产物经SDSPAGE薄层扫描分析纯度达987％以上，质谱测定分子量为2043kD与理论值一致，蛋白质N端序列测定结果为SPPAHTHRDFQPVLH与天然序列一致。生物活性检测证明可抑制鸡胚尿囊绒毛膜（CAM）的新生血管生成（Angiogenesis),并可抑制血管内皮细胞的增殖。因此用酵母表达系统可以得到具有生物活性的内皮抑素，经纯化后可用于进一步的生物功能和作用机理试验。

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