HCV特异性反义RNA表达载体的构建及活性评价

摘要:

反义RNA是反义技术的一个重要领域，为探索丙型肝炎病毒治疗新途径及验证转基因细胞模型HepG2.9706的有效性，设计了一条互补于HCV 5′NCR及翻译起始区(39713核苷酸)的反义RNA序列，将其插入pGL3载体SV40启动子下游，构建了HCV特异性的反义RNA真核表达载体(pHCV-asR)。通过PCR扩增、酶切反应及序列分析进行了初步鉴定，并将其转染HepG2细胞，通过RTPCR方法检测其在细胞中的表达并将pHCV-asR转染转基因细胞模型HepG2.9706，评价其对HCV 5′NCR的抑制活性。结果表明，构建的反义RNA表达载体插入序列正确，并能在HepG2细胞中表达；pHCV-asR在HepG2.9706中对HCV 5′NCR调控荧光素酶基因表达具有特异性的剂量依赖性抑制活性，最高抑制率可达57%。

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