人Leptin基因在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其生物学活性研究

摘要:

将人Leptin表达质粒pBV220-OB转化E.coliJM109，经热诱导获得了目的蛋白的表达。经SDS-PAGE鉴定分析，表达产物以包涵体形式存在，目的蛋白表达量占菌体总蛋白的40%以上。通过包涵体分离，Sephacryl S200HR凝胶和DEAE52离子交换层析及Hypersil C18柱反相色谱纯化，获得纯度在95%以上，内毒素含量小于10EU/mg的高纯度的重组人Leptin。Western-blot鉴定表明，纯化表达产物能和抗Leptin抗体特异性结合；蛋白质N端15个氨基酸序列分析结果和预期的序列一致。纯化产物经复性处理，其分子中Cys96和Cys146形成二硫键。体内活性检测显示，纯化和复性的rh-Leptin明显抑制BALB/c小鼠的进食和体重增长，提示其具有明显的生物学活性。

Abstract: