抗CD5单链抗体基因克隆和表达

摘要:

以分泌抗CD5单克隆抗体的杂交瘤细胞poly(A) mRNA为模板，通过RTPCR扩增出抗CD5单克隆抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL) cDNA片段组装出抗CD5单链抗体(ScFv) cDNA片段。该ScFv片段被克隆到pCANTAB 5E载体上，以E.coli TG1为宿主，进行噬菌体表面呈现。通过Molt4细胞表面分子CD抗原，对噬菌体表面呈现的ScFv进行免疫亲和富集筛选。经细胞ELISA鉴定，得到4株高亲和力克隆。DNA序列分析得知，单链抗体全长732碱基，其中VH为339碱基，VL为300碱基。抗CD5 ScFv在E.coli HB2151中以可溶形式分泌表达，产物主要分布于周质之中，占周质中总蛋白的20%。

Abstract: