恶性疟裂殖子表面蛋白1合成基因在毕赤酵母中的表达

摘要:

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1是当今疟疾疫苗主要的候选抗原。由于天然MSP1基因AT含量异常高(为74%)，使得克隆全长天然基因无法实现。本文已全合成了msp1基因(4940bp)，解决了该天然基因在异源系统中不稳定的问题。为制备大量msp1重组蛋白进行疫苗有效性试验，本研究建立了msp1基因在毕赤酵母中的表达，将合成的msp1基因克隆到毕赤酵母胞内表达载体pPIC3.5，构建了重组质粒pPIC3.5/msp1，用电击转化毕赤酵母得到重组转化子，经PCR证实msp1基因已整合于毕赤酵母染色体中。含有重组表达质粒的毕赤酵母菌经甲醇诱导后表达出全长msp1重组蛋白。表达产物能与识别MSP1分子二硫键依赖构象表位的特异性单抗发生很强的反应，表明msp1重组蛋白至少在该表位构象上与天然蛋白一致。从毕赤酵母中分离得到大量msp1为开展该蛋白的结构与功能，特别是测定其疟疾保护性免疫提供可能。

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