重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶的纯化和鉴定

摘要:

报道重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶(简称apPEP)的基因工程下游工艺研究。工程菌株E.coli BL21/pKKH\|PEP表达产物apPEP为可溶性蛋白，在NBS BioFlo 3000型5L自控发酵罐中经14h培养每升发酵液可达到22.5g干重菌体，含apPEP 3.0g左右。发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后，依次经Sephadex G-25、High performance Q sepharose FF(HP\|Q)、Phenyl separose 6 FF柱层析分离纯化，每升发酵产物最终可得0.86g纯度达96%的重组apPEP，比活力达到65.5u/mg，整个纯化工艺的蛋白回收率为8.2%，活力回收率为24.4%。纯化的apPEP经电喷雾质谱测定分子量为76464±30D，N端氨基酸序列与基因序列推导的一致。等电点为pI6.0左右。与Aeromonas hydrophila来源的PEP(pI=5.5)相近。

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