摘要:【背景】弧菌在全球范围内严重威胁人类健康，副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、拟态弧菌(Vibrio mimicus)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)与食用生的或未煮熟的海鲜所引起的胃肠道感染和败血症有关，因而备受关注。【目的】建立一种实时荧光定量PCR方法，用于检测副溶血性弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌，以提高检测效率和准确性。【方法】基于副溶血性弧菌和拟态弧菌的toxR基因、霍乱弧菌的ompW基因、创伤弧菌的vvhA基因设计特异性引物和探针，通过优化反应体系和条件建立四重实时荧光定量PCR体系。【结果】该实时荧光定量PCR方法检测限均为10 copies/µL，扩增效率均在100%左右；在特异性试验中，分别运用多重实时荧光定量PCR和常规PCR对目的菌基因组、非目的菌基因组和空白对照进行扩增，结果均只有目的弧菌扩增明显，表明本方法有良好的特异性；在抗干扰实验中，高浓度弧菌不干扰低浓度弧菌检测；每个浓度梯度进行3次重复实验，每组变异系数均小于1.5%，表明本方法重复性好。【结论】建立的多重实时荧光定量PCR方法可快速、特异地实现对副溶血性弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌的检测。