摘要:【目的】克隆倭蜂猴粪便微生物宏基因组的邻苯二酚1,2-双加氧酶基因catPLCgl，并对该酶进行异源表达及酶学特性研究。【方法】利用宏基因组高通量测序技术获得catPLCgl，并对其氨基酸序列进行分析。将catPLCgl重组到载体pEASY-E2中并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达，研究其酶学性质。【结果】catPLCgl全长852 bp，G+C含量48%，编码283个氨基酸，理论分子量为33.56 kD。重组CatPLCgl酶学性质分析显示最适作用pH为7.0，其中在pH 7.0–10.0范围内处理1 h后，酶活剩余90%以上；最适作用温度为40 °C，在25 °C和40 °C条件下稳定性较好，耐受210 h酶活性几乎不变。重组酶在最适条件下的动力学参数Km、Vmax和kcat分别为24.9 μmol/L、8.3 mmol/(min·g)和13.7 s–1；Fe2+、Hg2+、Cu2+、Triton X-100、SDS、Ag+强烈抑制该酶活性，而其它金属离子及有机试剂影响较小。【结论】从倭蜂猴粪便微生物宏基因组中克隆得到邻苯二酚1,2-双加氧酶基因catPLCgl，并对重组CatPLCgl酶学性质进行研究，该酶具有较好的热稳定性和耐碱性，在降解环境中的邻苯二酚和生产顺,顺-己二烯二酸方面具有应用潜力。

摘要:【背景】作为降解木聚糖的核心酶种，木聚糖酶可以有效促进木质纤维素的消化水解，在动物养殖领域应用广泛。来源于嗜热细菌贝斯其热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor bescii)的GH10家族木聚糖酶CbXyn10C最适温度为85 ℃，在80 ℃条件下具有良好的热稳定性，具有饲料工业应用潜力。【目的】为满足饲料制粒尤其是水产饲料加工过程的工艺要求，进一步提高木聚糖酶CbXyn10C的热稳定性并阐明其耐热机理。【方法】以CbXyn10C晶体结构为基础，采用刚性氨基酸引入、疏水作用网络重排2种策略对其热稳定性进行理性设计，获得在100 ℃条件下比活提高的单点突变体后，通过有益突变位点叠加策略进一步提升酶的热稳定性，最后采用分子动力学模拟技术分析其热稳定性提高的分子机制。【结果】共获得了4个稳定性提高的单点突变体A45P、T69P、F309V和A325P，其中突变体A45P效果最优。随着在A45P基础上另外3个突变位点的叠加，酶的热稳定性在不损失酶活的前提下得到了逐步提升。获得的四点突变体A45P/F309V/A325P/T69P的耐热性最好，其最适反应温度和熔解温度Tm值较野生型分别提高了5 ℃和6.8 ℃。分子动力学模拟技术分析发现4个位点的突变引入了新的氢键作用力且优化了疏水作用网络，进而导致酶的结构构象更加稳定。【结论】本研究不仅提高了木聚糖酶在饲料工业中的应用价值，而且对基于酶蛋白结构的稳定性分子改造提供了理论支持。

摘要:【背景】副溶血弧菌噬菌体qdvp001在防治副溶血弧菌污染方面具有巨大的应用潜力，但其对温度的敏感性较高，在较高的温度环境下会失活。【目的】利用阳离子脂质体包埋保护噬菌体qdvp001以提高其热稳定性，同时探究其脂质体包被液的抗菌活性。【方法】制备和表征负载副溶血弧菌噬菌体qdvp001的阳离子脂质体，测定阳离子脂质体包埋下的噬菌体经高温处理后的效价，并对脂质体包被液的杀菌活力进行测定。【结果】相对于未添加十八胺(octadecylamine，ODA，带正电的胺类化合物)的中性脂质体，ODA的添加使脂质体的表面带正电荷。脂质体平均粒径随着表面电荷绝对值的增加呈现减小的趋势，不同脂质体的多分散系数(polydispersity index，PDI)均在0.7以下，表明其具有较好的均匀性。负载副溶血弧菌噬菌体qdvp001的阳离子脂质体在50、60和70 ℃条件下表现出较好的热稳定性，随着脂质膜表面电荷的不断增大，其对噬菌体的热保护性也逐渐提升。此外，负载噬菌体qdvp001的阳离子脂质体也表现出比中性脂质体更好的抗菌活性。【结论】负载噬菌体qdvp001的阳离子脂质体在高温下对噬菌体有很好的保护性，同时具备更优良的抗菌活性，使噬菌体qdvp001有更好的应用前景。