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微生物学通报

  • 2016年第43卷第7期文章目次
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    • >封面
    • 43(7)封面

      2016, 43(7).

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      摘要:

    • >目录
    • 43(7)目录

      2016, 43(7).

      摘要 (1198) HTML (0) PDF 2.24 M (1594) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >经验交流
    • 基于Photoshop 和计数软件精准计数平板上菌落的新方法

      2016, 43(7):1646-1648. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160104

      摘要 (1426) HTML (749) PDF 1023.38 K (2757) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >主编点评
    • 模型动物中的肠道菌群分析及微生物组研究

      2016, 43(7):1649-1649. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.168007

      摘要 (1370) HTML (473) PDF 198.43 K (2704) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >主编点评文章
    • 高、低营养水平饲粮对环江香猪结肠菌群结构及代谢物的影响

      2016, 43(7):1650-1659. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150594

      摘要 (1619) HTML (524) PDF 757.33 K (2610) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】研究两种饲粮对环江香猪结肠内容物菌群结构及其代谢物的影响。【方法】选用33.5±8.1 kg的环江香猪10头,随机分为两组,每组 5头猪,单栏饲养,分别饲喂高营养水平饲粮(粗蛋白质含量为13.11%,消化能为14.73 MJ/kg)和低营养水平饲粮(粗蛋白质含量为9.77%,消化能为12.24 MJ/Kg)。饲喂75 d后屠宰,每组选3头猪采集结肠内容物提取细菌总 DNA,PCR扩增获得16S rRNA基因 V4标签片段,用于 Miseq高通量测序,基于QIIME平台比较结肠内容物菌群结构多样性;每组取5头猪的结肠内容物,利用气相色谱和液相色谱分析其中短链脂肪酸、氨氮、生物胺、吲哚和粪臭素的含量。【结果】硬壁菌门、拟杆菌门、螺旋体门和软壁菌门细菌为环江香猪结肠内容物中的优势菌门;饲粮组成不影响环江香猪结肠内容物菌群结构的多样性,高营养水平饲粮组结肠内容物中广古细菌含量显著低于、瘤胃球菌属和假丁酸弧菌属细菌含量显著高于低营养水平饲粮组;高营养水平饲粮组环江香猪结肠内容物中乙酸和丙酸含量显著低于、氨氮和尸胺含量显著高于低营养水平饲粮组。【结论】硬壁菌门、拟杆菌门、螺旋体门和软壁菌门细菌为环江香猪结肠内容物中的优势菌门,短期饲喂高营养水平饲粮可改变环江香猪结肠中的部分微生物含量及其代谢特性。

    • >回顾点评
    • 植物内生真菌次级代谢产物抗菌机制分析

      2016, 43(7):1660-1660. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.169007

      摘要 (1346) HTML (439) PDF 208.69 K (2195) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >工业微生物学
    • 混合糖发酵重组酿酒酵母的菌株构建和菊芋秸秆同步糖化发酵研究

      2016, 43(7):1411-1418. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150576

      摘要 (1869) HTML (436) PDF 1.29 M (2678) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】构建可用于纤维素乙醇高效生产的混合糖发酵重组酿酒酵母菌株,并利用菊芋秸秆为原料进行乙醇发酵。【方法】筛选在木糖中生长较好的酿酒酵母YB-2625作为宿主菌,构建木糖共代谢菌株YB-2625 CCX。进一步通过rDNA位点多拷贝整合的方式,以YB-2625 CCX为出发菌株构建木糖脱氢酶过表达菌株,并筛选得到优势菌株YB-73。采用同步糖化发酵策略研究YB-73的菊芋秸秆发酵性能。【结果】YB-73菌株以90 g/L葡萄糖和30 g/L木糖为碳源进行混合糖发酵,乙醇产量比出发菌株YB-2625 CCX提高了13.9%,副产物木糖醇产率由0.89 g/g降低至0.31 g/g,下降了64.6%。利用重组菌YB-73对菊芋秸秆进行同步糖化发酵,48 h最高乙醇浓度达到6.10% (体积比)。【结论】通过转入木糖代谢途径以及rDNA位点多拷贝整合过表达木糖脱氢酶基因可有效提高菌株木糖发酵性能,并用于菊芋秸秆的纤维素乙醇生产。这是首次报道利用重组酿酒酵母进行菊芋秸秆原料的纤维素乙醇发酵。

    • 产胶原酶的蜡样芽胞杆菌发酵条件优化及酶的分离纯化

      2016, 43(7):1419-1428. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150519

      摘要 (1430) HTML (460) PDF 1.47 M (2187) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】优化蜡样芽胞杆菌R75E菌株产胶原酶的条件,并通过蛋白分离纯化技术获得高纯度胶原酶。【方法】利用单因素及正交试验优化蜡样芽胞杆菌R75E产胶原酶的发酵条件及发酵培养基,将发酵液离心除菌后得到粗酶液,对其依次通过硫酸铵分级沉淀、Butyl FF疏水层析及SuperdexTM 200凝胶过滤层析等方法对目标胶原酶进行分离纯化,利用SDS-PAGE电泳检测其纯度。【结果】优化后发酵条件为培养温度41 °C、接种量6%、培养时间36 h,优化后发酵培养基为葡萄糖10 g/L、蛋白胨5 g/L、起始pH 7.0,粗酶液酶活力较优化前提高了2.9倍;将该粗酶液经过一系列纯化后得到纯度超过90%的胶原酶产物,其纯化倍数和回收率分别为18.4和1.1%。【结论】获得蜡样芽胞杆菌R75E的最佳产酶条件,并对胶原酶分离纯化的方法进行了探索,为微生物胶原酶的开发应用奠定基础。

    • 马克斯克鲁维酵母菌菊粉酶的异源表达及低聚果糖制备工艺优化

      2016, 43(7):1429-1437. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150562

      摘要 (1417) HTML (768) PDF 3.57 M (2388) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】低聚果糖是新型的食品和保健品原料,具有广阔的市场需求。以菊粉酶水解菊粉制备低聚果糖的酶法工艺是先进的绿色制造。本研究旨在获得高产的菊粉酶菌株及以菊粉为原料酶法制备低聚果糖的优化工艺。【方法】采用基因工程手段克隆马克斯克鲁维酵母菌(Kluyveromyces marxianus)的菊粉酶基因,实现其在毕赤酵母中的高效表达;测定菊粉酶在不同pH、温度、金属离子和底物浓度等条件下的酶活变化趋势,获得最佳的反应参数;通过高效液相色谱法检测水解产物,获得不同酶量水解产物各组分分布。【结果】菊粉酶工程菌株在10 L发酵罐中的产菊粉酶活达1 570 U/mL、蛋白质含量为2.75 g/L发酵液;菊粉酶最适反应参数为:在体积为1 L的反应体系中,pH 5.0、反应温度50 °C、含0.2 mmol/L Mg2+以及菊粉浓度为8%。在该条件下,酶量为10 U时菊粉被完全水解。水解产物中单糖和二糖含量仅为9.25%,而低聚果糖(C3?C8)含量为90.75%,且C3?C5低聚果糖含量高达72.92%。【结论】克隆了K. marxianus菊粉酶基因并实现了高效表达,获得了水解菊粉制备低聚果糖的最佳工艺条件。为菊粉酶的大量生产及低聚果糖的酶法制备奠定了良好的基础。

    • >海洋微生物学
    • 南海深海沉积物放线菌多样性分析

      2016, 43(7):1438-1447. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150563

      摘要 (1739) HTML (456) PDF 1.33 M (2990) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】免培养和纯培养相结合分析南海深海沉积物放线菌多样性。【方法】免培养方法通过提取沉积物宏基因组DNA,利用放线菌门特异性引物扩增放线菌16S rRNA基因序列,构建放线菌16S rRNA基因克隆文库,文库经RFLP (restriction fragment length polymorphism)分析后挑选代表序列测序并进行多样性指数分析和系统发育分析。可培养方法利用8种培养基进行菌株分离,对排重后的菌株进行16S rRNA基因序列多样性分析。【结果】构建的两个深海位点的16S rRNA基因克隆文库在放线菌门的放线菌纲(Actinobacteria)、酸微菌纲(Acidimicrobiia)、腈基降解菌纲(Nitriliruptoria)和嗜热油菌纲(Thermoleophilia) 4个纲中均有分布;两个位点中的种群结构有差异,N40-4位点的优势种群是放线菌纲的链霉菌目(Streptomycetales);N63-4位点的优势种群是腈基降解菌纲的腈基降解菌目(Nitriliruptorales)。8种培养基共分离出41株放线菌,根据形态特征排重后得到的19株菌分布于10个不同的属,12个不同的种,其中稀有放线菌属比例较高,菌株OAct400为潜在的微杆菌属(Microbacterium)新种。【结论】南海深海沉积物蕴含着丰富的放线菌物种资源及大量未知种群,具有进一步研究的价值。

    • 湛江沿海潮间带产胞外纤溶活性酶类海洋真菌的生物多样性分析

      2016, 43(7):1448-1461. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160262

      摘要 (1598) HTML (467) PDF 1.64 M (2498) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】研究湛江沿海硇洲岛和徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带产胞外纤溶酶样酶和纤溶酶原激活物海洋真菌的生物多样性,为发掘新型溶栓药物奠定基础。【方法】采用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)和酵母膏蛋白胨葡萄糖(YPD)培养基分离培养海洋真菌,采用真菌rDNA转录间隔区1-5.8S rDNA-转录间隔区2 (ITS1-5.8S-ITS2)片段的序列分析及其系统进化树构建的方法鉴定分离培养的海洋真菌,采用脱脂牛奶马铃薯葡萄糖琼脂(SM-PDA)培养基培养法筛选产胞外蛋白酶的海洋真菌,采用海水纤维蛋白马铃薯葡萄糖琼脂(FN-PDA)培养基培养法筛选产胞外纤溶酶样酶和/或纤溶酶原激活物的海洋真菌。【结果】从湛江沿海的硇洲岛和徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带分离、培养和鉴定了海洋真菌446株,含真菌的98个种,分布于真菌域子囊菌门(Ascomycota)和担子菌门(Basidiomycota)的6个纲、18个目、46个科、65个属;其中产胞外蛋白酶的海洋真菌有265株,61个种,分布于41个属;产胞外纤溶酶样酶的海洋真菌有67株,22个种,分布于14个属;产胞外纤溶酶原激活物的海洋真菌有84株,23种,分布于13个属;优势属为曲霉属(Aspergillus),其次为青霉属(Penicillium)。【结论】湛江沿海潮间带可分离培养的产胞外纤溶酶样酶和纤溶酶原激活物的海洋真菌物种丰富多样,是发掘新型溶栓药的丰富资源。

    • >环境微生物学
    • 辽宁盘锦三角洲翅碱蓬根系及内生细菌群落多样性

      2016, 43(7):1462-1472. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150538

      摘要 (1683) HTML (477) PDF 667.06 K (2458) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】翅碱蓬(Suaeda heteroptera)是一种典型的盐碱指示物,对重金属和石油污染的盐碱土壤有一定的修复作用,但是关于翅碱蓬根系与根系内生微生物之间的关系、微生物的多样性以及根系微生物在生物修复中所起作用的研究较少。本文以盘锦“红海滩”的翅碱蓬为例,研究翅碱蓬根系及根系内生细菌菌群种类和结构。【方法】通过传统的培养方法和非培养的高通量测序方法对翅碱蓬根系土壤样品、根系附着物样品以及根系匀浆样品中微生物群落多样性进行分析。【结果】传统方法共分离得到67株细菌,选择代表菌28株,根据其形态特征和生理生化特征,结合16S rRNA基因序列比对进行鉴定,它们分别属于盐单胞菌属(Halomonas)、海细菌属(Marinobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、副球菌属(Paracoccus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、游动球菌属(Planococlus)、沙雷氏菌属(Serratia)、刘志恒菌属(Zhihengliuella)等。利用高通量测序技术对样品进行多样性分析,其中根系附着物样品的菌群丰度和多样性最高,依次分别为根系土壤样品和根系匀浆样品。3个样品中有效序列群落结构可分为12个门,包括酸杆菌门(Acidobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、绿菌门(Chlorobi)、绿弯菌门(Chloroflexi)、蓝菌门(Cyanobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes) 、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、浮霉菌门(Planctomycetes)、变形菌门(Proteobacteria)、螺旋体门(Spirochaetes)和疣微菌门(Verrucomicrobia)。根系匀浆样品中蓝菌门为优势门类,占整个菌群的42%,变形菌门为次优势类群,占33%。变形菌门在根系附着物样品中为优势门类,占46%,拟杆菌门为次优势门类,占16%。根系土壤样品中拟杆菌门为优势门类,占整个菌群的37%,次优势类群为变形菌门,占20%。【结论】翅碱蓬根系和内生菌具有丰富的多样性,其根系微生物可能会在重金属和石油污染土壤的生物修复中起一定的修复作用。

    • 河北九莲城淖尔可培养放线菌多样性及抗菌活性筛选

      2016, 43(7):1473-1484. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150907

      摘要 (1525) HTML (502) PDF 692.40 K (2609) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】勘探干涸的九莲城淖尔土壤放线菌多样性并进行活性筛选,以期发现药用微生物资源,为新抗生素的发现奠定基础。【方法】采用15种分离培养基,以稀释涂布法分离放线菌;根据分离菌株的16S rRNA基因序列同源性分析放线菌多样性;发酵液经乙酸乙酯萃取,菌丝体经丙酮浸提,获得提取浓缩物样品;样品通过纸片扩散法进行抗菌活性初筛;抗菌阳性菌株采用PCR技术进行Ⅰ型聚酮合酶(PKS I) KS域、Ⅱ型聚酮合酶(PKS II) KS域和非核糖体多肽合成酶(NRPS) A结构域抗生素生物合成基因的检测。【结果】从11份盐湖土壤样品中分离纯化到251株放线菌,其分布于放线菌纲的10个目15个科31个属,其中优势菌属为链霉菌属和拟诺卡氏菌属;251株放线菌中包括57株耐(嗜)盐放线菌,其优势菌属为拟诺卡氏菌属(22株)和涅斯捷连科氏菌属(15株)。基于16S rRNA基因序列的系统发育分析显示,菌株J11Y309为糖霉菌科潜在新属,菌株J12GA03为分枝杆菌科潜在新物种。96株放线菌活性检测结果显示,56株至少对1株检定菌具有抗菌活性,阳性率为58.3%;56株有活性的放线菌中,47株至少含有1种抗生素生物合成基因,其中17株同时具有3种抗生素生物合成基因。【结论】干涸的九莲城淖尔土壤中含有较为丰富的药用放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种和新抗生素的潜力。

    • >基础微生物学
    • 酵母PMT1基因参与内质网应激的调控机制

      2016, 43(7):1485-1490. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150560

      摘要 (1511) HTML (506) PDF 1.69 M (2443) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)可激活细胞保护性信号级联反应——未折叠蛋白质反应(Unfolded protein response,UPR)。研究表明,酵母细胞中的UPR信号通路由转录因子Hac1p和ERS感应因子Ire1p共同介导。前期研究发现:蛋白质-O-甘露糖转移酶1 (Protein-O-mannosyltransferase 1,PMT1)基因缺失能延长酵母细胞的复制性寿命,其机制与上调UPR通路活性相关。本文进一步探讨PMT1基因缺失在酵母ERS反应中的作用。【方法】观察PMT1基因与IRE1或HAC1基因双缺失酵母菌株(pmt1Dhac1D和pmt1Dire1D)在ERS反应条件下的克隆形成能力;通过比色法检测各菌株的细胞增殖活性;RT-PCR检测各菌株UPR通路下游部分靶基因的转录水平。【结果】与对照菌株比较,PMT1基因缺失菌株(pmt1D)在ERS反应条件下生长较慢,而HAC1和IRE1单基因缺失菌株(hac1D和ire1D)在ERS反应条件下无法存活;在hac1D或ire1D菌株的基础上进一步缺失PMT1基因,可以改善hac1D菌株在ERS反应条件下的生长状态;但缺失PMT1基因没有上调hac1D菌株UPR通路靶基因的转录水平。【结论】缺失PMT1基因可增强hac1D菌株对ERS诱导剂衣霉素的抗性,机制与已知的UPR通路不相关,提示可能存在其它途径参与ERS反应的调控。

    • 一株产L-天冬氨酸酶大肠埃希氏菌的噬菌体分离和生物学特性

      2016, 43(7):1491-1498. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150579

      摘要 (1436) HTML (754) PDF 2.10 M (2174) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】从大肠埃希氏菌CICC 11021S发酵液中分离一株噬菌体,对其生物学特性进行研究。【方法】采用双层平板法分离噬菌体CICC 80003;利用透射电镜观察噬菌体形态;提取噬菌体基因组,核酸内切酶处理并进行凝胶电泳;分析噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、pH和温度稳定性、宿主谱。考察CICC 80003对CICC 11021S生长和L-天冬氨酸酶活力的影响。【结果】CICC 80003噬菌斑圆形透明,有明显晕环;头部规则,直径约50?60 nm,尾部长约120?130 nm;基因组能被核酸内切酶BamH I和Mlu I切开;最佳感染复数0.1,潜伏期5 min,裂解期25 min,平均裂解量约86个;最适pH值8.0;90 °C温育15 min,噬菌体全部失活;能裂解大肠埃希氏菌和沙门氏菌的部分菌株。发生噬菌体污染时,CICC 11021S无法正常生长,基本检测不到L-天冬氨酸酶活力。【结论】CICC 80003属于长尾噬菌体科dsDNA噬菌体,液体环境中能够彻底裂解大肠埃希氏菌CICC 11021S。

    • >农业微生物学
    • 不同种植年限苹果根际土可培养根皮苷耐受菌的分布及多样性

      2016, 43(7):1499-1512. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150915

      摘要 (1424) HTML (459) PDF 2.51 M (2148) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】筛选能够耐受苹果根系自毒物质根皮苷的细菌,研究不同种植年限苹果(Malus Mill.)根际可培养根皮苷耐受菌的微生物群落组成及多样性,旨在为筛选高效根皮苷降解菌、一定程度上了解苹果连作障碍机制并克服或减轻其造成的损失提供科学依据。【方法】以根皮苷为唯一碳源,筛选不同种植年限的根皮苷耐受细菌,通过ARDRA酶切聚类(Amplified rDNA restriction analysis)和16S rRNA基因序列分析确定分离的根皮苷耐受菌的分类地位,并利用生物信息学分析根皮苷耐受菌群落结构、多样性及与理化因子的关系。【结果】从种植年限为3、8、15、20和25年的苹果砧木山荆子[Malus baccata (Linn.) Borkh.]根际土壤中共分离103株根皮苷耐受菌,并在65%的相似水平上分成18个类群,分属于13个属,其优势菌分别为芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)和新鞘脂杆菌属(Novosphingobium)。分析发现种植年限为3年的根际土壤中分离的根皮苷耐受菌的物种丰富度最高,种植年限为15、20和25年的根际土壤中分离的根皮苷耐受菌的物种组成相似,且不同种植年限土壤的理化因子与根皮苷耐受菌的群落组成具有一定的相关性(P<0.05)。冗余分析(Redundancy analysis,RDA)表明阿魏酸是影响群落结构的重要因子。【结论】不同种植年限苹果根际土壤中根皮苷耐受菌种类多样性丰富,其群落组成与土壤理化因子具有一定相关性,阿魏酸是影响根皮苷耐受菌群落结构的重要环境因子。研究结果可为探讨缓解苹果连作障碍的途径提供基础资料。

    • 致病疫霉拮抗菌株YR-7 的分离鉴定及其活性物质

      2016, 43(7):1513-1523. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150617

      摘要 (1613) HTML (438) PDF 2.09 M (2605) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】从黄河边的农田土壤中分离筛选拮抗致病疫霉的粘细菌,鉴定目标菌株,分析其发酵上清液的稳定性及对马铃薯晚疫病菌的抑制效果,为活性物质分离鉴定及抗马铃薯晚疫病菌生物农药的研发奠定基础。【方法】采用兔粪诱导法分离菌株,通过平板对峙法筛选对马铃薯晚疫病菌有拮抗作用的粘细菌,通过形态特征、生理生化特征以及16S rRNA基因序列分析对菌株进行鉴定。采用称重法测定菌株生长曲线,通过平皿法测定菌株不同生长时期发酵上清液对致病疫霉的菌丝生长抑制率和浓缩发酵上清液的稳定性。通过马铃薯离体叶片涂布浓缩发酵上清液和接种病原菌孢子悬浮液法,测定该菌株对马铃薯晚疫病的防病作用。【结果】从土壤样品中共分离获得 7株粘细菌,其中 4株拮抗致病疫霉,拮抗效果最强的为 YR-7菌株,菌丝的生长抑制率为96%,该菌株被鉴定为 Myxococcus xanthus。培养 7 d后,菌株发酵上清液对致病疫霉的抑制活性趋于稳定。浓缩发酵上清液经30?50 °C处理后,对致病疫霉菌丝的生长抑制率可达50.90%,高于 50 °C时抑菌活性逐渐下降,90 °C处理后菌丝的生长抑制率仍可达 25.45%。浓缩发酵上清液在pH 4.0?9.0条件下比较稳定,保持 40.21%以上菌丝的生长抑制率,当pH<4.0或 pH>9.0时,抗菌活性显著降低。活性物质不能被蛋白酶降解,其抗菌活性不受紫外线、自然光照射的影响。对马铃薯离体叶片的生防效果检测表明,YR-7的浓缩发酵上清液处理组叶片相对病斑面积仅为0.35%,对照组的相对病斑面积高达68.19%。【结论】粘细菌菌株 YR-7可以产生抗马铃薯晚疫病菌的次生代谢产物,抗菌活性物质具有较好的稳定性,可以有效抑制致病疫霉侵染马铃薯叶片,具有开发成抗马铃薯晚疫病生物农药的潜在价值。

    • >食品微生物学
    • 一株食醋污染菌CICC 10774 的鉴定及其生长代谢特性

      2016, 43(7):1524-1531. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150565

      摘要 (1587) HTML (658) PDF 1.74 M (2784) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】对食醋污染菌CICC 10774 进行多相分类学鉴定,并对其生长特征和代谢产物进行研究。【方法】通过16S rRNA 基因序列系统发育学分析,结合形态特征和生理生化特性确定该菌株的分类学地位。通过分光光度法测定菌株生长的最适温度和最适pH 值,确定其最佳培养条件。采用HPLC 测定该菌株代谢产物。【结果】多相鉴定分析表明菌株CICC 10774 为耐酸乳杆菌(Lactobacillus acetotolerans),革兰氏染色呈阳性,兼性厌氧生长,具有明胶酶活性,能够利用葡萄糖、果糖、甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺、熊果苷、七叶灵、水杨苷、纤维二糖、海藻糖和龙胆二糖作为碳源底物生长。生长代谢特性研究表明,CICC 10774 的最适生长温度为37 °C,最适pH 值为5.0,代谢产物主要为醋酸和乳酸,是一株典型的耐酸菌。【结论】对引起食醋污染的耐酸乳杆菌CICC 10774 生长代谢特征进行了研究,为食醋生产企业生产过程的微生物控制提供理论基础。

    • >兽医微生物学
    • 异育银鲫源杀鲑气单胞菌杀鲑亚种的分离鉴定

      2016, 43(7):1532-1539. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150567

      摘要 (1386) HTML (504) PDF 521.27 K (2018) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】分离鉴定江苏省扬州市养殖场异育银鲫患病病原。【方法】采用常规的理化特性和分子生物学的方法,对从濒死异育银鲫肝脏处分离到的菌株 YZ-1进行表型生物学、分子生物学及药敏试验的系统研究。【结果】该菌株 16S rRNA基因(序列长度 1 446 bp,GenBank登录号为 JX164202)与其它杀鲑气单胞菌 16S rRNA基因一致性在 99%?100%之间,构建发育树确定该菌株为杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida)。人工回感可导致异育银鲫死亡。药敏试验结果显示:对头孢呋辛、复方新诺明、恩诺沙星等23种抗生素敏感;对阿米卡星、四环素、大观霉素、头孢拉定等 11种抗生素中度敏感;对青霉素 G、链霉素、庆大霉素、氟苯尼考、万古霉素等10种抗生素耐药。【结论】研究结果证实引起异育银鲫死亡的病原为杀鲑气单胞菌杀鲑亚种。

    • >微生物育种
    • 产肌醇酿酒酵母基因工程菌的构建

      2016, 43(7):1540-1546. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150924

      摘要 (1790) HTML (509) PDF 1.13 M (2626) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】过表达酿酒酵母肌醇合成关键酶基因 INO1,促进肌醇合成,构建能够分泌肌醇的基因工程菌株。【方法】构建 rDNA介导的 INO1基因多拷贝整合表达载体 pURIH,电转化酿酒酵母 Y01菌株,构建工程菌株 YI2-1和 YI2-2,荧光定量 PCR方法分析 INO1基因表达量。敲除 KanMX抗性基因,HPLC检测重组菌发酵液中肌醇含量。【结果】获得 INO1基因过表达菌株 YI2-1和 YI2-2,YI2-1的 INO1基因表达量是出发菌 Y01的 16.235倍。敲除 KanMX抗性基因的菌株命名为 YI2-1△KP,初步检测 YI2-1△KP产肌醇量为 627 mg/L。【结论】 rDNA介导的 INO1基因多拷贝整合表达载体 pURIH能够有效地过表达目的基因;过表达菌株合成的肌醇不仅能满足自身的需要,而且能够向胞外分泌,具有潜在的工业应用价值。

    • >医学微生物学
    • 耻垢分枝杆菌MSMEG_6281 过表达对菌株生长和形态的影响

      2016, 43(7):1547-1554. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150551

      摘要 (1672) HTML (493) PDF 2.58 M (2565) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】耻垢分枝杆菌 (Mycobacterium smegmatis mc2155,mc2155) MSMEG_6281为结核分枝杆菌自溶素 Rv3717的同源蛋白,通过建立过表达 MSMEG_6281的耻垢分枝杆菌菌株,推测该蛋白对耻垢分枝杆菌肽聚糖代谢的影响。【方法】利用 RT-PCR方法检测乙胺丁醇 (Ethambutol,EMB)作用后 MSMEG_6281基因的表达变化;以耻垢分枝杆菌基因组 DNA为模板,采用 PCR技术克隆 MSMEG_6281基因,构建分枝杆菌表达质粒 pVV16-MSMEG_6281,进一步建立 MSMEG_6281过表达的耻垢分枝杆菌菌株;利用生长曲线检测 MSMEG_6281过表达对耻垢分枝杆菌生长的影响;利用扫描电子显微镜分析 MSMEG_6281过表达引起的耻垢分枝杆菌形态变化。【结果】 EMB处理引起 MSMEG_6281基因表达上调;构建了过表达 MSMGE_6281的耻垢分枝杆菌菌株(mc2155/pVV16-MSMEG_6281);过表达 MSMGE_6281的耻垢分枝杆菌生长缓慢,菌体形态由短杆状转变为长杆状。【结论】MSMGE_6281的过表达可改变耻垢分枝杆菌形态。 MSMGE_6281的功能与细胞壁肽聚糖水解相关,在 mc2155细胞壁形态维持方面发挥重要作用。

    • >专论与综述
    • 病毒介导的海洋球石藻(Coccolithophores)鞘脂类代谢调控

      2016, 43(7):1555-1564. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150555

      摘要 (1308) HTML (551) PDF 1.10 M (2506) 评论 (0) 收藏

      摘要:海洋球石藻(Coccolithophores)是一种全球广泛分布且具有重要生态功能的真核浮游植物,有些种类是大洋和近岸常见的赤潮种。自然海域中,病毒感染是导致球石藻死亡和赤潮消亡的一个关键因素。基于一株海洋球石藻 Emiliania huxleyi及其特异性裂解病毒全基因组测序注释的结果,研究者们发现病毒可能通过基因横向转移从宿主基因组中获取了一系列与鞘脂类代谢相关的关键酶基因,进而在一定程度上掌控了宿主鞘脂类代谢,大量合成、积累病毒性鞘脂类物质,并最终诱导宿主细胞以凋亡的形式死亡。因此,病毒介导的宿主鞘脂类代谢在调节病毒与宿主间相互作用中具有重要意义。本文着重综述海洋球石藻病毒与宿主间的基因横向转移、病毒介导的宿主鞘脂类代谢特点及其生态学意义,以期深入了解海洋球石藻病毒与宿主间复杂的相互作用关系。

    • 固定化微生物在生物膜式生化需氧量传感器中的应用现状

      2016, 43(7):1565-1578. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150559

      摘要 (1457) HTML (504) PDF 1.70 M (3047) 评论 (0) 收藏

      摘要:生化需氧量(Biochemical oxygen demand,BOD)微生物传感器是一种快速检测水样中有机污染物含量的设备,固定化微生物是其核心部件之一,对其稳定性、响应时间、使用寿命及实际应用范围等性能有着重要影响。生物膜式 BOD传感器较其他类型的 BOD微生物传感器具有结构简单、灵敏度高、响应时间短等优点,受到广泛的研究和应用。本文主要针对固定化微生物在生物膜式 BOD传感器中的应用情况,概述较典型的微生物固定化方式的原理、特点及应用;总结几类应用较多或具有较好前景的载体材料,并讨论载体特性与传感器性能之间的关系;综述微生物在该领域的应用现状;简要介绍生物膜式 BOD传感器的实际应用及商业化现状,比较其与另外几种 BOD微生物传感器的优缺点;分析生物膜式 BOD传感器中固定化微生物现存的一些问题及其发展趋势。

    • 不动杆菌属(Acinetobacter)细菌降解石油烃的研究进展

      2016, 43(7):1579-1589. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150561

      摘要 (1548) HTML (1310) PDF 958.06 K (3481) 评论 (0) 收藏

      摘要:不动杆菌属细菌分布广泛,作为重要的石油烃降解者,在乳化和降解石油烃、降低石油烃生物毒性等方面有重要作用。本文概述了不动杆菌属细菌对烷烃、芳香烃等石油烃组分的降解,总结了该属细菌中已发现的烷烃氧化酶和芳香烃氧化酶,综述了该属细菌所分泌的表面活性剂的类型和乳化机理,讨论了固定化对该属细菌降解石油烃的影响,展望了该属细菌降解石油烃的应用前景。基于此,作者认为探索不动杆菌属细菌降解石油烃的详细机理和途径、发现关键酶、寻找遗传工具、构建基因工程菌、发掘环境友好的固定化材料,应是未来的研究重点及热点。

    • 表面自由能在环境微生物粘附研究中的应用进展

      2016, 43(7):1590-1597. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150581

      摘要 (1524) HTML (587) PDF 727.40 K (3048) 评论 (0) 收藏

      摘要:在环境领域中,对微生物粘附的利用和控制越来越受到研究者的关注。其中,微生物的表面自由能作为细胞表面重要特性,对微生物的粘附行为有重要影响。本文总结了微生物粘附过程中涉及的热动力学理论、Derjaguin-Landau-Verwey-Overbeek (DLVO)以及扩展DLVO理论,阐述了微生物表面自由能在该过程的重要性。基于此,介绍了接触角表征微生物表面自由能的方法体系及影响因素;分析了微生物表面自由能及其分量的分布特征、与物质组成的关系。最后根据被粘附对象的不同,总结了环境微生物表面自由能在固体基质、液体基质或者微生物相互之间粘附中的应用;指出未来研究发展的方向应关注环境微生物表面自由能的标准化表征及其在复杂环境中的应用。

    • 铁载体-抗生素耦合物:一种新型的抗菌制剂

      2016, 43(7):1598-1604. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160081

      摘要 (1635) HTML (483) PDF 837.63 K (5554) 评论 (0) 收藏

      摘要:随着细菌对抗生素耐药性的增强,寻找一种新型抗菌制剂越来越重要。细菌细胞外膜对药物分子的通透性降低是引起致病菌产生耐药性的一个重要因素,克服膜介导耐药性的方法之一是利用铁载体-抗生素耦合物。铁载体是细菌分泌的一种小分子铁离子螯合物,与铁离子螯合后被特定的外膜受体识别并转运至胞浆内供细菌利用。人工合成的铁载体-抗生素耦合物被特定外膜受体识别后主动转运跨过外膜进入胞质内。当铁载体-抗生素耦合物到达细胞质,它们通过释放药物杀死微生物,这可以阻止进一步获取铁离子,并且耦合物自身也可以作为一种抗菌剂。本文综述了铁载体-抗生素耦合物作为一种新型抗菌制剂的研究进展,有助于为进一步研发新型抗菌药物提供理论基础,对治疗耐药性细菌性疾病具有潜在的重要意义。

    • 两相系统在疏水性有机污染物高效降解菌富集培养中的应用研究进展

      2016, 43(7):1605-1611. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150588

      摘要 (1291) HTML (525) PDF 791.63 K (2449) 评论 (0) 收藏

      摘要:环境中疏水性有机污染物(Hydrophobic organic pollutants,HOPs)的浓度日益增加,获取 HOPs高效降解功能微生物能有效提高HOPs污染治理效率。近年来,利用两相系统促进 HOPs微生物降解转化的研究已取得一定进展。本文重点从两相系统的结构特点及其富集HOPs降解功能微生物的原理、主要影响因素和应用情况等方面进行综述,并在此基础上对两相系统在毒害性HOPs微生物加速降解脱毒中所存在的主要问题及其应用前景进行讨论和展望。

    • >高校教改纵横
    • 食用菌产业专业化人才培养模式的探索

      2016, 43(7):1612-1615. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160134

      摘要 (1288) HTML (474) PDF 394.86 K (2622) 评论 (0) 收藏

      摘要:针对食用菌产业高素质专业人才培养目标的要求,从专业培养目标的导向性、课程设置的滞后性、实训教学的缺失性、教学方式的被动性等方面分析了食用菌专业人才培养模式存在的问题。以华南农业大学食用菌专业人才培养模式为例,从食用菌产业对专业人才培养目标的定位与特色、专业理论与实践课程设置的优化创新、教学方式与考核方式的优化创新等方面,探究食用菌产业专业人才的培养模式,为进一步完善现有的人才培养方案、推动人才培养模式的改革提供一定的参考。

    • >生物实验室
    • 环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测志贺氏菌

      2016, 43(7):1616-1626. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160027

      摘要 (1347) HTML (432) PDF 2.42 M (2374) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合应用,建立一种可应用于志贺氏菌快速检测的LAMP-LFD技术。【方法】以福氏志贺氏菌的侵袭性质粒抗原 H (ipaH)基因为检测靶标设计 3对特异性引物(其中上游内引物Sfl-ipaH-FIP由生物素标记),进行LAMP反应;同时设计1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针Sfl-ipaH-HP,与获得的LAMP产物进行特异性杂交,杂交产物经 LFD完成检测。【结果】优化后的LAMP反应条件为63 °C 40 min,加上LFD结果判读共需50 min。LAMP-LFD方法能够特异性检测出福氏志贺氏菌,而对肠炎沙门氏菌等其它4种导致腹泻的致病菌和创伤弧菌等5种常见食物源性致病菌,以及4株不同大肠杆菌的检测结果呈阴性。该方法针对福氏志贺氏菌的检测灵敏度为 1.0×102 CFU/mL或 4 CFU/反应,针对人工污染鲤鱼肠组织的检测灵敏度是5.0×102 CFU/mL,是以LAMP外引物 Sfl-ipaH-F3/Sfl-ipaH-B3的常规 PCR方法的100倍。【结论】建立的LAMP-LFD技术具有操作简单、检测快速准确、检测成本低等优点,有望在志贺氏菌的常规监测和即时检测中被普及使用。

    • 去甲基万古霉素菌种低温冷冻、冷干保藏条件优化及10 年菌种保藏效果

      2016, 43(7):1627-1634. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160076

      摘要 (1340) HTML (465) PDF 980.63 K (2422) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】针对去甲基万古霉素产生菌不耐保藏的问题,改进菌种保藏方法,对超低温液氮保藏、?80 °C低温冷冻保藏、冷干保藏方法跟踪考察10年保藏稳定性,评价不同保藏方法对去甲基万古霉素产生菌的保藏适用性。【方法】采用甘油作基础保护剂进行超低温液氮保藏和?80 °C低温冷冻保藏,采用脱脂牛奶作基础保护剂进行冷干保藏,针对超低温液氮保藏进行降温速率考察,研究非渗透性冷冻保护剂海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等对 3种保藏方法的冻存影响,对优选出的保藏方法进行10年跟踪考察。【结果】3种保藏方法冻后菌种存活率依次为:?80 °C低温冷冻保藏>超低温液氮保藏>冷干保藏。液氮保藏最适降温速率为快速冷冻。优选出最佳保护剂配方:超低温液氮保藏为甘油8.0%,海藻糖3.5%;?80 °C低温冷冻保藏为甘油6.0%,PVP5.0%;冷干保藏为脱脂牛奶,6.0%海藻糖。采用优化保藏条件,液氮保藏10年存活率稳定在70.6%,菌种发酵水平为入藏水平的92.9%。【结论】在优化条件下,尤以超低温液氮保藏适合于去甲基万古霉素产生菌长期保藏。

    • 不同实验方法检测常用有机溶剂对细菌活性的影响及其安全使用限量

      2016, 43(7):1635-1645. DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150595

      摘要 (1832) HTML (1290) PDF 3.69 M (4569) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】采用不同实验方法测定常用有机溶剂二甲基亚砜 (DMSO)、丙酮和乙醇对细菌活性的影响,以指导抗菌类药物体外抑菌实验所用溶剂的选择和添加限量。【方法】采用常规体外抑菌实验方法(纸片扩散法、肉汤稀释法),并参照生长曲线法检测有机溶剂 DMSO、丙酮和乙醇对大肠杆菌(Escherichia coli)及金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用,采用扫描电子显微镜(SEM)观察溶剂作用后的细菌形态变化。【结果】3种溶剂对E. coli和S. aureus抑菌率达到20%时,在肉汤稀释法下,DMSO、丙酮、乙醇的浓度(体积比)分别为1.00%、0.25%、2.00%和1.00%、1.00%、0.50%;在生长曲线法下,溶剂浓度(体积比)分别为0.50%、1.00%、0.50%和1.00%、0.50%、0.50%;而在纸片扩散法下,32% (体积比) DMSO和32% (体积比)乙醇对E. coli产生明显抑菌圈,但3种溶剂对 S. aureus均无抑菌圈出现。3种方法比较后得出:当 3种溶剂的抑菌率达到20%时,溶剂浓度(体积比)均低于 0.5%,对细菌整体生长活性影响较小。SEM结果表明控制溶剂使用限量可有效减少其对E. coli生长过程的影响。【结论】相对于DMSO和丙酮,乙醇对微生物生长繁殖能力的影响更加明显;采用相同浓度有机溶剂时,液态条件下(肉汤稀释法和生长曲线法)微生物受到有机溶剂的影响较大。

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