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摘要:【目的】建立瘤胃产甲烷菌T-RFLP多样性分析方法，并研究厌氧真菌与产甲烷菌共培养液在不同时间传代对共存产甲烷菌菌群的影响。【方法】利用产甲烷菌mcrA基因特异性引物PCR扩增后，选择合适内切酶对扩增产物进行内切，分析内切后末端片段长度多态性，测定共培养液在不同传代频率时共存产甲烷菌多样性的变化。【结果】利用Msp I内切酶分析发现，末端片段长度约为470 bp的产甲烷菌为共培养液中的优势甲烷菌，共培养液传代至第15代时，片段长度约为130 bp和200 bp的产甲烷菌也成为共培养中的优势菌株；比较发现，Taq I能更好地内切共培养液中甲烷菌mcrA基因序列，瘤胃内容物及3 d传代共培养液中产甲烷菌主要为末端片段长度约为70、100、200、270、300、330和470 bp的菌株，共培养液在体外传代培养过程中，末端片段长度约为70、100、270和470 bp的产甲烷菌变化更为显著。Taq I比较分析不同传代频率(3、5和7 d)对共培养液中产甲烷菌菌群结构的影响表明，3 d传代的共培养液中产甲烷菌菌群与瘤胃内容物较为相似，而5 d和7 d传代的共培养液中产甲烷菌菌群间差异较小，但与瘤胃内容物差异较大，导致不同传代频率的共培养液中产甲烷菌菌群间显著差异的最主要菌株为末端片段长度约为100 bp的产甲烷菌，其次为末端片段长度约为70 bp和270 bp的产甲烷菌。【结论】利用建立的快速可行的瘤胃产甲烷菌T-RFLP方法分析表明，传代频率显著影响厌氧真菌与产甲烷菌共培养液中产甲烷菌的菌群结构，3 d传代共培养液内产甲烷菌菌群与瘤胃内容物更相似。

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摘要:【目的】研究弗氏柠檬酸菌(Citrobacter freundii) 1,3-丙二醇合成的代谢过程。【方法】构建甘油脱氢酶基因GSR-lacZ、1,3-丙二醇氧化还原酶基因PDO-lacZ和甘油脱水酶基因GL-lacZ等报告基因。在此基础上，构建3个相应的转座子突变文库。【结果】筛选到6株突变子，其相应关键酶表达水平提高1?11倍，1,3-丙二醇产量提高幅度为3%?50%。对转座子插入位点分析显示，5株突变子插入位点均为β-内酰胺酶(CKO_02592)编码基因，1株突变子插入位点为二氢硫辛酰胺基转移酶(CKO_02433)编码基因。进一步分析发现，β-内酰胺酶基因突变显著提高甘油脱水酶和甘油脱氢酶的表达水平，而1,3-丙二醇氧化还原酶表达水平没有变化；二氢硫辛酰胺基转移酶基因突变显著提高1,3-丙二醇氧化还原酶表达水平，其他两种关键酶基因表达水平不变。【结论】β-内酰胺酶和二氢硫辛酰胺基转移酶基因能够分别影响1,3-丙二醇合成代谢途径关键酶的表达，为构建工程菌株打下基础。

摘要:【目的】D-乳酸脱氢酶是催化丙酮酸合成D-乳酸的关键酶。由于其不耐热，从而限制了D-乳酸高温发酵菌株的构建。本文从詹氏乳杆菌中克隆新型D-乳酸脱氢酶研究其酶学性质，为构建D-乳酸高温发酵菌株，进一步降低D-乳酸生产成本奠定基础。【方法】通过克隆詹氏乳杆菌的D-乳酸脱氢酶，将其进行体外表达，并与来自植物乳杆菌中的D-乳酸脱氢酶的最适温度、最适pH、动力学参数及热稳定性和热失活性相比较，研究詹氏乳杆菌D-乳酸脱氢酶的耐热性。【结果】詹氏乳杆菌的D-乳酸脱氢酶最适温度(45 °C)比植物乳杆菌中的D-乳酸脱氢酶的最适温度(30 °C)高很多，热失活的时间和温度均要比植物乳杆菌中D-乳酸脱氢酶高很多。同时其催化效率(kcat/Km)是植物乳杆菌D-乳酸脱氢酶的3倍左右。【结论】詹氏乳杆菌的D-乳酸脱氢酶具有更好的耐热性和更高的催化活力。

摘要:【目的】培养分离大西洋脊热液区的超嗜热古菌，为进一步认识该生态系统中的物种及其特点奠定基础。【方法】将大西洋脊热液区海水样品用YTSV培养基富集培养，选取其中富集效果最佳的TVG2培养物用减绝稀释法分离纯化。对所分离菌株进行形态、生理生化特征等分析，并通过分子生物学手段对其进行初步鉴定。【结果】菌株TVG2属于超嗜热厌氧球菌，直径约1.0 μm；生长温度范围50?88 °C，最适生长温度82 °C；生长pH范围为5.0?9.0，最适生长pH值为6.5；生长NaCl浓度为1.0%?4.0% (质量体积比)，最适生长浓度为2.5%；元素硫可显著提高菌株TVG2的生物量，但非生长必需；丙酮酸钠能显著促进该菌株生长，但葡萄糖对其生长则有抑制作用。根据其形态特征、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析，确定菌株TVG2属于热球菌属。【结论】用YTSV培养基从大西洋脊热液区样品中分离获得超嗜热厌氧菌株TVG2，并确定其为Thermococcus属成员，命名为Thermococcus sp. TVG2。

摘要:【目的】评价白腐真菌Irpex lacteus XX-5、Trichaptum abietinum 1302BG、Ceriporia lacerata P2、Bjerkandera adusta XX-2处理铜绿微囊藻废水的应用潜力。【方法】采用分批次实验研究pH、温度、铜绿微囊藻浓度、金属离子、氮源、磷源对白腐真菌I. lacteus XX-5、T. abietinum 1302BG、C. lacerata P2、B. adusta XX-2溶解铜绿微囊藻的影响。【结果】在不同外源条件下，4种白腐真菌对铜绿微囊藻的抑制效果明显，均达60%以上。菌株C. lacerata P2和B. adusta XX-2受外源条件的影响很小，菌株C. lacerata P2的抑制率达70%以上，菌株B. adusta XX-2的抑制率达60%以上；菌株T. abietinum 1302BG、I. lacteus XX-5在不同外源条件下抑制率均会发生相应的变化，但抑藻率均可达60%以上。【结论】研究所使用的4种白腐真菌对抑制铜绿微囊藻具有较好的应用潜力，尤其是菌株C. lacerata P2和B. adusta XX-2。

摘要:【目的】利用宏基因组学的方法从红树林土壤中筛选新型酯水解酶类。【方法】构建红树林土壤宏基因组文库，采用以三丁酸甘油酯为底物的功能筛选方法，对筛选出的阳性克隆进行系统发育树分析，实现新型磷脂酶A1基因的原核表达，研究重组酶的酶学性质。【结果】筛选到一个新的磷脂酶A1编码基因phop1413 (GenBank登录号KF767097)，测序表明其全长1 413 bp，可编码470个氨基酸残基，表达蛋白约51.7 kD，表达量高达220 mg/L，NCBI中Blast比对及系统进化树分析显示该蛋白属于磷脂酶类的fAMILY Ⅵ家族；酶学性质分析表明，该重组酶的最适反应底物为对硝基苯酚己酸酯，比酶活为124 U/mg；最适反应温度为54 °C，最适pH 7.8；50 °C热处理1.5 h剩余相对酶活为44%，表现出很好的热稳定性。【结论】通过构建宏基因组文库利用功能筛选方法获得一个新型磷脂酶A1基因；研究中获得的新型磷脂酶A1性质较好，可用于植物油酶法脱胶。

摘要:【目的】探究高效降解3-苯氧基苯甲酸(3-Phenoxybenzoic acid，3-PBA)的鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.) SC-1对苯酚的降解特性。【方法】采用HPLC测定微生物降解体系中苯酚残留量，考察环境条件对菌株SC-1降解苯酚的影响；分析不同培养时间苯酚降解体系混合样品的HPLC谱图，确定其降解中间产物。【结果】菌株SC-1能在基础盐培养基中以苯酚为唯一碳源和能源生长，在初始pH 7.0、30 °C条件下，24 h可完全降解100 mg/L苯酚；Cu2+、Ba2+、Mn2+等对其降解苯酚有不同程度的抑制作用；HPLC谱图分析，初步确定邻苯二酚是菌株SC-1降解苯酚的中间产物，且该菌株可在48 h内完全降解100 mg/L邻苯二酚。【结论】菌株SC-1对苯酚及邻苯二酚均有较强的降解能力，为完善3-PBA的降解途径及污染3-PBA或含酚废水或含酚农药残留的降解提供了数据参考。

摘要:【目的】通过研究云南白族成年人肠道菌群群落结构，探索肠道菌群结构与云南白族人健康长寿的相互关系。【方法】以43份采自云南省昆明市(Urban)和大理白族自治州洱源县农村(Rural)成年白族志愿者的粪便样品为研究对象，通过种属特异性聚合酶链式反应(定性PCR)和基于聚合酶链式反应的变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)对其中的优势菌群进行了分析，并测定样品中短链脂肪酸(SCFAs)含量。【结果】短链脂肪酸(SCFAs)含量测定结果显示，Rural和Urban志愿者的短链脂肪酸含量差异不显著；定性PCR结果显示Rural志愿者肠道内的乳杆菌属和双歧杆菌属的多样性明显区别于Urban志愿者；依据泳道轨迹光密度的不同对16S rRNA基因V3区PCR-DGGE图谱进行基于非加权平均距离聚类分析(Unweighted pair-group method with arithmetic means，UPGMA)，显示两组样品按照组别明显地聚为两簇，多样性指数分析也呈现Rural志愿者肠道菌群多样性大于Urban的趋势；进一步对Rural谱带回收克隆测序，并构建系统发育树图，结果显示样品中双歧杆菌属、肠杆菌属和肠球菌属具有较高的多样性，是Rural健康成年志愿者肠道中的优势菌群。【结论】综合上述分析，昆明城市志愿者和大理白族自治州洱源县农村志愿者肠道菌群群落结构呈现区分趋势，多样性差异不显著。该研究为后续探索宿主肠道菌群与健康长寿的相互关系提供了数据基础。

摘要:【目的】为明晰蝉类昆虫唾液腺中细菌的组成及其中是否存在内共生菌Candidatus Sulcia muelleri。【方法】以斑透翅蝉Hyalessa maculaticollis (Motschulsky)为材料，采用16S rRNA限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)对其唾液腺细菌群落组成进行分析。【结果】斑透翅蝉唾液腺中共存在7种细菌，分别属于变形菌门和厚壁菌门；其中绿脓假单胞杆菌Pseudomonas aeruginosa和肠杆菌Enterobacter sp.为优势细菌，分别占克隆总数的48.7%；另外5种细菌(反硝化细菌热单胞菌Thermomonas brevis、鞘胺醇单胞菌Sphingomonas sp.、芽孢杆菌Bacillus sp.、厌氧球菌Anaerococcus sp.和Methyloversatilis sp.)总共占克隆文库的2.05%。【结论】首次采用分子生物学方法明晰斑透翅蝉唾液腺的细菌群落；其细菌群落组成相对简单，且两种细菌占主导地位；此外，头喙亚目昆虫体内特有的内共生菌Candidatus Sulcia muelleri未在斑透翅蝉唾液腺中检测出，表明该共细菌可能仅在腹部的贮菌体中分布；斑透翅蝉唾液腺中的细菌是否普遍存在于蝉科昆虫唾液腺中以及在取食韧皮部汁液过程中的功能有待进一步研究。

摘要:【目的】以苎麻(Boehmeria nivea L. Gaud)根及根围土壤为研究材料，进行苎麻促生菌的筛选，并初步探索其促生作用机制。【方法】首先，以溶磷和解钾为基本筛选标准，初筛菌株在实验室条件下测定多项促生能力进行复筛；然后通过种子萌发、盆栽试验测定菌株对苎麻的促生效应，最后，通过形态观察、生理生化特性和16S rRNA基因序列同源性分析，对促生菌株进行分类学鉴定。【结果】从苎麻根和根围土壤中分离得到了13株菌同时具备溶磷和解钾能力，其中4株菌(RA-2、RAM-2、RAM-5和RAM-6)具备产铁载体、产IAA和产氨能力。种子萌发和盆栽试验的测定结果显示：4株菌株均能促进苎麻种子的萌发和植株的生长，其中菌株RA-2和RAM-5相比于对照处理能显著提高苎麻种子的萌发率、幼根长、株高和根系干重。分类鉴定结果显示菌株RA-2和RAM-5均属于伯克霍德菌属(Burkholderia)。【结论】从苎麻根围筛选到具有促生能力的菌株，为进一步开发研制苎麻专型促生菌剂或专型微生物有机肥提供资源。

摘要:【目的】从贝类样品中分离到一株沙门氏菌裂解性噬菌体SLMP1，对其进行鉴定及生物学特性分析。【方法】采用双层平板法从贝类样品中分离沙门氏菌噬菌体SLMP1，观察噬菌斑特征，分析SLMP1的宿主范围；利用聚乙二醇8000沉淀浓缩SLMP1颗粒，用氯化铯等密度梯度离心纯化；采用透射电子显微镜观察纯化的SLMP1颗粒；采用酚-氯仿法提取SLMP1核酸，通过核酸酶处理分析核酸类型；分析SLMP1的热稳定性、pH稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线及裂菌效果。【结果】SLMP1噬菌斑直径约2–3 mm，圆形透明、边缘清晰；SLMP1能裂解肠沙门氏菌肠亚种和鼠伤寒沙门氏菌；SLMP1头部呈二十面体，直径约62 nm，含非收缩性尾部，尾长约110 nm，属于长尾病毒科；SLMP1核酸为双链DNA；SLMP1在30–60 °C稳定，在pH 4.0–11.0稳定，最佳感染复数为0.001，感染宿主菌潜伏期为10 min、裂解期为120 min、裂解量为51；SLMP1在液体环境中具有良好的裂菌效果。【结论】SLMP1属dsDNA长尾科裂解性噬菌体，具有沙门氏菌生物抑菌剂的应用潜力。

摘要:【目的】了解临床分离志贺菌中CRISPR/Cas系统的分布特征并分析其与毒力基因的关系。【方法】以聚合酶链式反应(PCR)方法，采用10对引物分别对57株临床分离志贺菌中CRISPR1、cas2-cas1、cas6e-cas5、cas7、cse2、cse1-cas3基因和毒力基因ipaH、ial、ipaBCD、virA进行检测。对CRISPR1的PCR结果进行测序，并用CRISPR finder在线软件对CRISPR1基因座进行分析。通过卡方检验初步分析CRISPR/Cas系统与毒力基因的关系。【结果】测序结果显示，CRISPR1基因座中间隔序列数目较少且在不同菌株间一致性较高；57株志贺菌中，84.2% (48/57)的志贺菌中可检测到CRISPR/Cas系统，其中68.8% (33/48)的志贺菌中cas6e-cas5基因或(和) cse2基因中发现插入序列；毒力基因ipaH、ial、virA、ipaBCD的检出率依次为100%、100%、98.2%和87.7%；毒力基因ipaBCD的阳性率与活性CRISPR/Cas系统的分布无关(P>0.05)。【结论】CRISPR/Cas系统广泛存在于临床分离志贺菌中；部分cas基因中有插入序列；并未发现志贺菌中活性CRISPR/Cas系统与毒力基因的分布有关。

摘要:嗜盐微生物能够在高盐环境中生存，其耐盐机制一直是微生物学家研究的热点。目前嗜盐微生物耐盐机制的研究主要集中在细胞吸K+排Na+作用、胞内积累小分子相容性溶质及嗜盐酶的氨基酸组成特性三个方面。文章从基因水平综述了嗜盐菌的耐盐机制，并对其在高盐废水处理上的应用进行讨论与展望。

摘要:假单胞菌合成的代谢产物种类繁多。本文对假单胞菌合成的具有产业化前景或已实现产业化的藻酸盐、维生素B12、环状脂肽、吩嗪、单乙酰基间苯三酚、2,4-二乙酰基间苯三酚、鼠李糖脂以及聚羟基脂肪酸酯等六类复杂化合物或聚合物以及它们合成机制的研究进展进行综述，并就上述物质合成研究的发展方向进行展望。

摘要:细菌形成的生物被膜，可保护细菌不易被抗生素杀死，这给临床上相应疾病的治疗及医疗器械的消毒带来极大困难。研究表明，噬菌体及其裂解酶对生物被膜有降解作用。噬菌体能清除细菌在有生物活性或无生物活性的介质表面形成的生物被膜。此外，噬菌体裂解酶比如LySMP、肽酶CHAPk、细胞壁溶解酶CWHs等能清除特定的生物被膜，这可能与裂解酶直接溶菌和裂解细菌细胞外基质有关。同时，与抗生素、钴离子、氯等物质联合使用时，噬菌体对生物被膜的清除作用会更强。本文从噬菌体、噬菌体编码的裂解酶、以及它们联合其他物质对细菌生物被膜的作用进行综述，并对其实际应用做了展望。

摘要:黏膜是很多病原体入侵机体的重要入口，黏膜疫苗能诱导产生黏膜保护性免疫应答和系统性免疫应答，阻止病原微生物黏附、入侵和繁殖。但多数候选黏膜疫苗的安全性、稳定性、免疫效力及保护作用还无法达到理想的效果，佐剂或载体的使用改善了黏膜疫苗存在的不足，使黏膜疫苗有了广阔的发展前景。文章综述了提高黏膜免疫的方法及研究进展。

摘要:微生物增产煤层气技术能够产生新的煤层气，有效缓解能源紧张问题，是煤层气开采、增产的研究热点。微生物增产煤层气技术的核心机理是煤的厌氧生物降解产甲烷。国内外研究学者通过实验室模拟研究了本源和外源微生物的降解煤产甲烷能力及影响因素。部分煤层气公司富集或分离获得了高效产甲烷菌群，并研究了微生物增产煤层气技术的现场实施方法。开发煤的预处理技术、构建新型高效菌群等可进一步提高微生物的增产煤层气能力，促进微生物增产煤层气技术的应用。

摘要:随着产学研紧密结合的提出，高校人才培养模式必须与之适应。作为我国高等教育的新生力量―应用型本科院校，生物工程专业在人才培养模式设置过程中，应以产学研基地建设为契机，以培养学生实际应用能力和专业分析能力为核心，不断进行改革和创新。本文以徐州工程学院生物工程专业为例，总结以往产学研合作教育经验，分析了人才培养模式相关问题，指出了应用型本科院校生物工程专业实施产学研合作教育的实践过程。

摘要:【目的】建立一种快速准确的三七根腐病病原真菌毁坏柱孢霉(Cylindrocarpon destructans)的分子定量检测方法，探讨毁坏柱孢霉与植株生长和AM真菌侵染之间的数量效应关系。【方法】根据GenBank登录的毁坏柱孢霉rDNA基因IGS序列片段，设计特异性引物对CDU2和CDL2b，利用含有SYBR Green I的实时荧光定量PCR建立毁坏柱孢霉定量检测方法，检测三七根际土壤毁坏柱孢霉rDNA基因IGS片段拷贝数，并分析其与植株生物量和AM真菌侵染之间的关系。【结果】发病植株根际土壤毁坏柱孢霉rDNA基因IGS片段拷贝数显著高于健康植株。三七根际土壤中毁坏柱孢霉数量与植株地上部生物量以及菌根侵染强度呈显著负相关(P＜0.05)，与根系生物量以及根内丛枝丰度相关性不显著。【结论】基于实时定量PCR技术建立的毁坏柱孢霉的分子定量方法能够有效反映三七根际土壤中毁坏柱孢霉的数量及其与植株生长和AM真菌侵染的关系。