• 2013年第40卷第6期文章目次
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      2013, 40(6).

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      2013, 40(6).

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      摘要:

    • >工业微生物学
    • 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)发酵生产乙偶姻的pH调控策略

      2013, 40(6):921-927.

      摘要 (1567) HTML (0) PDF 11.59 M (3149) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】为了提高Bacillus subtilis CCTCC M 208157发酵生产乙偶姻的效率。【方法】在7 L发酵罐水平上考察不同pH条件对菌株生长及乙偶姻合成的影响。【结果】pH对菌株合成乙偶姻有显著影响, pH 4.5有利于细胞合成乙偶姻, 但是延迟期较长; pH 5.5时菌株生长较快, 但乙偶姻的产量偏低。因此提出了两阶段pH控制策略: 发酵前期(0?16?h), 控制pH 5.5; 发酵中后期(16?72 h), 控制pH 4.5。【结论】通过此策略, 菌株合成乙偶姻的能力得到进一步提高, 乙偶姻的产量、产率和生产强度分别为32.7 g/L、0.41?g/g和0.91 g/(L·h), 分别比初始发酵条件下提高了41%、42%和69%。

    • 一株耐冷玫红假裸囊菌HD1031的鉴定及其所产纤维素酶的研究

      2013, 40(6):928-938.

      摘要 (1581) HTML (0) PDF 4.36 M (2213) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】以纤维素为唯一碳源, 从四川省阿坝自治州黄龙沟的高山低温环境中分离筛选产纤维素酶的耐冷菌, 并研究菌株的产酶特征。【方法】根据菌株的ITS序列分析及形态特征, 对菌株进行鉴定。利用DNS法测定纤维素酶酶活性。【结果】从四川省阿坝自治州黄龙沟的高山腐殖土中筛选出一株产纤维素酶的耐冷菌HD1031, 经鉴定该菌为玫红假裸囊菌(Pseudogymnoascus roseus)。该菌可在4 °C?25 °C生长, 最适生长温度为16?°C?17 °C。该菌在以微晶纤维素和玉米芯粉为碳源、硫酸铵和Tryptone为氮源的培养基中, 17 °C、160 r/min摇瓶发酵8 d后产生纤维素酶, 其中内切葡聚糖酶酶活为366.67?U/mL, 滤纸酶酶活87.6 U/mL, β-葡萄糖苷酶酶活90.8 U/mL, 酶最适反应pH为6.0, 最适反应温度为50 °C。【结论】筛选获得一株产纤维素酶的耐冷菌HD1031, 此菌株所产纤维素酶在20 °C?40 °C下活性较高, 对热敏感, 具有低温纤维素酶的特点。

    • >海洋微生物学
    • 硇洲岛潮汐带牡蛎相关可培养细菌多样性

      2013, 40(6):939-950.

      摘要 (1491) HTML (0) PDF 1.01 M (2081) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】了解南海硇洲岛潮汐带香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)相关可培养细菌的多样性。【方法】应用纯培养法分离样品中的细菌(含放线菌), 采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析方法研究这些分离菌株的生物多样性。【结果】用补充0–25% (w/v) NaCl的MA、MH和NA培养基从样品中分离到102株细菌, 在形态观察和部分生理生化实验结果的基础上去冗余, 选取74个代表性菌株进行基于16S rRNA基因序列的系统发育分析。结果表明, 这些菌株归为38个物种, 属于4个大的系统发育类群(Gamma-proteobacteria, alpha-Proteobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes)的16个科、18个属。大多数菌株属于Gamma-Proteobacteria亚门(45株, 60.8%), 其余依次是Firmicutes门(12株, 16.2%)、Bacteroidetes门(11株, 14.9%)和Alpha-Proteobacteria亚门(6株, 8.1%)。大多数菌株与其系统发育关系最密切的有效发表种典型菌株之间(16S rRNA基因序列相似性为94.3%–99.8%)存在一定的遗传差异, 其中JSM 111069可能代表Carnobacteriaceae科的潜在新属; 菌株JSM 111039和JSM 111085可能分别代表Bacillus属的两个新物种, 菌株JSM 111020、JSM 111072和JSM 111090可能分别代表Pseudoalteromonas、Proteus和Idiomarina属的新物种。【结论】南海硇洲岛潮汐带牡蛎中存在较为丰富的原核生物多样性, 并潜藏着一定数量的微生物新类群(物种)。

    • 抗菌活性海洋真菌HN4-13的鉴定及其发酵优化

      2013, 40(6):951-958.

      摘要 (6387) HTML (0) PDF 11.37 M (15964) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】鉴定一株来源于连云港近岸海域沉积物并具有分泌抗菌活性代谢产物的真菌菌株HN4-13, 优化其合成抗菌活性物质的发酵条件。【方法】通过形态学观察及ITS 序列分析方法对菌株HN4-13进行鉴定; 通过基础发酵培养基筛选、碳氮源及无机盐的单因素试验, 继而采用正交试验设计优化其合成抗菌活性物质的发酵条件。【结果】菌株HN4-13被鉴定为黄柄曲霉(Aspergillus flavipes), 其分泌抗菌活性产物的发酵条件为: 4%蔗糖、0.5%蛋白胨、0.1% KCl、0.06% NaH2PO4、28 °C、1%接种量、160 r/min培养9?d。【结论】实验结果为进一步分离纯化菌株HN4-13所产抗菌活性代谢产物提供了基础。

    • >环境微生物学
    • 一株嗜水气单胞菌HS01的偶氮还原脱色特性

      2013, 40(6):959-967.

      摘要 (1414) HTML (0) PDF 723.18 K (2293) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】研究嗜水气单胞菌HS01的偶氮染料还原脱色特性。【方法】建立HS01/偶氮染料/电子供体序批式厌氧反应体系, 研究Fe(III)/腐殖质还原菌HS01以偶氮染料为电子受体的厌氧呼吸特性及影响因素; 并构建HS01/偶氮染料/电子供体/铁氧化物体系, 探讨铁氧化物对HS01偶氮还原的影响。【结果】HS01可将金橙I迅速还原, 菌体增殖; 柠檬酸、丙三醇、蔗糖和葡萄糖体系中, 16 h金橙I的脱色率分别达87%、85%、88%、90%; 不同pH和金橙I初始浓度条件下的脱色率不同; 在反应体系中加入α-FeOOH, 脱色率从90%增加至95%, Fe(II)生成量与无染料对照体系相当。【结论】HS01能以葡萄糖为电子供体, 金橙I为唯一电子受体, 进行厌氧呼吸; 蔗糖、柠檬酸、丙三醇也可作为有效的电子供体, 脱色率依次递减; 甲酸、乙酸、乳酸、乙醇及丙酸不能作为HS01厌氧呼吸的电子供体。金橙I脱色的最佳pH范围为6.0?8.0; 高浓度(2.0 mmol/L)金橙I负荷下, HS01仍保持高脱色率(>85%)。在HS01/α-FeOOH/金橙I体系中, 异化铁还原作用与偶氮呼吸作用同时发生, 异化铁还原能促进偶氮脱色, 而脱色对Fe(III)还原没有明显影响。这可为铁/腐殖质还原菌在环境修复和废水处理等领域的应用提供研究积累。

    • 自然环境中T-2毒素降解菌的筛选与鉴定

      2013, 40(6):968-978.

      摘要 (1630) HTML (0) PDF 2.42 M (2053) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】在自然环境中筛选和鉴定能够降解T-2毒素的菌株。【方法】取对虾养殖池水样、养殖池沉泥样品和对虾混合饲料中分离到的镰孢菌, 于GYM产毒培养基中培养14 d后引入自然条件下气载细菌, 继续培养至28 d, 采用LC-MS/MS检测其中T-2毒素含量。然后结合稀释涂布、平板划线、革兰氏染色、镜检, 从镰孢菌产毒培养液中毒素含量明显降低的菌悬液中筛选出T-2毒素降解菌, 用16S rRNA分析方法对其进行系统发育分析及菌种鉴定, 并验证两菌株的降毒能力与不同基质中二者的联合降毒能力。【结果】以从对虾养殖环境中分离到的5株镰孢菌作为试验菌种, 在其产毒培养过程中分离到2株T-2毒素降解菌, 16S rRNA鉴定结果分别为弯曲假单胞菌和尼泊尔葡萄球菌, 对T-2毒素的降解率分别为90.9%和85.5%, 但两者降毒能力并无显著差异(P>0.05); 其联合作用也有较好降毒效果, 与两菌株单独作用无显著差异(P>0.05), 不同基质对其联合降毒作用影响不大(P>0.05)。【结论】新的T-2毒素降解菌的发现为进一步探明T-2毒素降解基因和开发T-2毒素生物降解酶提供了研究基础。

    • 大连湾原油降解菌的分离和多样性分析

      2013, 40(6):979-987.

      摘要 (1231) HTML (0) PDF 988.85 K (2555) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】研究大连湾原油污染海域可培养原油降解菌的多样性, 并获得新的原油降解菌。【方法】通过大连湾海水、海泥和海绵样品采集, 以原油作为唯一碳源, 培养、富集、分离筛选原油降解菌, 根据16S rRNA基因序列确定其系统进化地位。【结果】通过形态观察和16S rRNA基因分析, 共获得22个属的50株菌。其中, 有6株菌的16S rRNA序列与最相近的菌株序列一致性仅为95%?97%, 可能是潜在的新菌。单菌实验表明, 45株菌具有石油降解能力。【结论】揭示了大连湾可培养原油降解菌的多样性, 并获得了新的原油降解菌, 为海洋石油污染的生物治理提供新资源。

    • 一株十溴联苯醚高效好氧降解菌的筛选、鉴定及降解特性

      2013, 40(6):988-998.

      摘要 (1569) HTML (0) PDF 977.67 K (2503) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】从广东贵屿镇电子垃圾拆解地采集的沉积物样品中分离十溴联苯醚(BDE-209)高效好氧降解菌, 并考察其对BDE-209的降解特性。【方法】通过生理生化实验和16S rRNA测序鉴定菌种, 正交实验优化降解条件, 并分析不同降解体系及影响因素对菌降解BDE-209的影响。【结果】鉴定结果显示, 该BDE-209好氧降解菌为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)。B. brevis对1 mg/L BDE-209 5 d的降解率可达54.38%。正交实验结果表明, B. brevis降解BDE-209的最优条件为: pH 7, 投菌量3 g/L, 温度30 °C。降解特性研究结果显示B. brevis对BDE-209降解的最佳菌龄为36 h, 最佳氮源为(NH4)2SO4, B. brevis对Cu2+、Cd2+有较好的耐受性, 但Cu2+和Cd2+的存在会影响其对BDE-209的降解。当Cu2+浓度在1?5 mg/L, Cd2+浓度在0.3?0.5 mg/L范围内时, B. brevis对BDE-209降解均可达50%以上。【结论】B. brevis对BDE-209有很好的降解效率, 研究结果对BDE-209的好氧微生物降解及环境中BDE-209的生物修复具有较好的科学意义和应用价值。

    • >农业微生物学
    • 杀菌剂对感染越冬桃小食心虫的白僵菌的抑制作用

      2013, 40(6):999-1007.

      摘要 (1351) HTML (0) PDF 496.44 K (1914) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】桃小食心虫是我国果树上发生最普遍的食心类害虫, 其室内人工饲养是综合防治研究的基础, 但面临着田间越冬种群大量感染白僵菌死亡, 给实验室种群的建立带来很大困难。因此筛选出对球孢白僵菌高效的杀菌剂用于解决桃小食心虫种群建立时感染白僵菌的问题。【方法】利用液体摇床振荡法和平皿十字交叉法测定16种常见杀菌剂对球孢白僵菌孢子萌发和菌丝生长的影响。【结果】筛选出9种杀菌剂, 其中, 腐霉利和中生菌素对孢子萌发的抑制效果好, 常规用量抑制效果分别为97.88%±1.53%和93.22%±2.36%; 抑霉唑和戊唑醇对菌丝生长的抑制效果明显, 常规用量抑制效果分别达100.00%±0.00%和98.43%±0.99%; 咪酰胺、丙环唑、噻菌灵、腈菌唑和吡唑醚菌酯对孢子萌发和菌丝生长的抑制效果都好。同时测定了这9种杀菌剂常规浓度及其5倍和10倍稀释液对桃小食心虫的毒力, 结果表明有5种杀菌剂对桃小食心虫稍有不利影响。【结论】4种杀菌剂, 中生菌素、戊唑醇、吡唑醚菌酯和噻菌灵可用于解决桃小食心虫种群建立时越冬幼虫的感染白僵菌问题。

    • 苜蓿根瘤菌17560细胞膜膜脂组成分析及DGTS合成基因克隆与表达

      2013, 40(6):1008-1017.

      摘要 (1445) HTML (0) PDF 2.37 M (2338) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】分析一株分离自黑龙江省的苜蓿根瘤菌在低磷胁迫及正常磷含量条件下细胞膜脂的组成, 并从该菌中克隆和鉴定细胞膜无磷脂二酰基甘油三甲基高丝氨酸(DGTS)合成基因。【方法】分别在不同磷含量的Sherwood基本培养基中进行根瘤菌培养, 采用Bligh-Dyer方法提取细胞膜脂, 以文献报道Sinorhizobium meliloti (苜蓿中华根瘤菌)菌株1021的脂类图谱和磷脂PE、PG、PC标准品作为参照, 利用薄层层析方法分析不同磷含量条件下培养菌株的细胞膜脂组成。根据GenBank中已发表的DGTS合成基因btaA和btaB序列设计引物, 以产DGTS菌株基因组DNA为模板, 扩增btaA和btaB同源基因, 并在E. coil BL21(DE3)表达。同时检测表达菌株是否合成细胞膜无磷脂DGTS以验证基因功能。对菌株17560进行16S rRNA基因序列分析。【结果】分离自黑龙江省的苜蓿根瘤菌17560与Sinorhizobium meliloti的16S rRNA基因序列相似性高达99.8%, 但其细胞膜脂组成明显不同于参比菌株Sinorhizobium meliloti 1021的膜脂组成。在低磷胁迫条件下, 该菌株的细胞膜脂主要由OL和DGTS等无磷脂组成, 但OL的组成明显不同, 该菌株含有3种不同类型的鸟氨酸脂(OLs), 而参比菌株Sinorhizobium meliloti 1021只含有一种类型的鸟氨酸脂(OL)。在正常磷含量条件下, 该菌株的细胞膜脂主要由PE和一种未知的含氨基磷脂组成, PG与PC的含量均较少, 而参比菌株Sinorhizobium meliloti 1021的细胞膜脂主要由PE、PG与PC组成。通过PCR扩增从产DGTS 菌株17560中获得 1 913 bp DNA片段, 经序列分析发现其中有两个ORF与菌株Sinorhizobium meliloti 1021的btaA和btaB基因序列相似性均为99%。将该DNA片段克隆于pET-30a(+)得到重组质粒pLH01, 转化宿主菌获得表达菌株E. coli BL21(DE3)·pLH01, 经IPTG诱导后产生相对分子量约为45 kD和25 kD的蛋白。薄层层析验证重组菌细胞膜脂组成, 结果表明, 表达菌株E. coli BL21(DE3)·pLH01可以在IPTG诱导后合成无磷脂DGTS, 而转入空载体pET-30a(+)的阴性对照菌株E. coli BL21(DE3)·pET-30a(+)则不能合成。【结论】系统发育地位相同的苜蓿根瘤菌株的细胞膜脂组成明显不同; 苜蓿根瘤菌的细胞膜组成随培养基中的磷含量不同而变化, 低磷胁迫条件下其细胞膜脂主要由OL和DGTS等无磷脂组成; 在Sinorhizobium 膜脂中首次发现一种未知的氨基磷脂及3种不同类型的鸟氨酸脂(OLs); 从菌株17560中克隆获得2个DGTS合成基因btaA和btaB, 在大肠杆菌中成功表达, 并证实了所表达基因的功能。

    • >兽医微生物学
    • 鲎源抗菌肽对大肠杆菌的抑杀机理

      2013, 40(6):1018-1026.

      摘要 (1709) HTML (0) PDF 22.92 M (1453) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】研究鲎源抗菌肽鲎素对大肠杆菌抑杀的作用机理, 为防治大肠杆菌引起的肠道疾病提供新的潜在抗菌药物。【方法】利用牛津杯法和微量MH肉汤稀释法测定其抗菌活性, 激光共聚焦扫描显微镜观察鲎素对大肠杆菌的结合、分布及杀伤过程, 透射电镜观察鲎素对大肠杆菌超微结构的影响, 并采用琼脂糖凝胶阻滞电泳研究其对大肠杆菌基因组DNA和RNA的影响。【结果】鲎素对大肠杆菌的最小抑菌浓度与最低杀菌浓度分别为5 mg/L和20 mg/L; 激光共聚焦扫描显微镜和透射电镜观察发现鲎素能快速作用于细胞表面, 并发生聚集现象, 随着作用时间的延长能导致细胞膜结构的破坏和细胞内含物的释放; 通过琼脂糖电泳结果显示鲎素也能够作用于大肠杆菌基因组DNA, 并呈浓度依赖关系, 10 mg/L鲎素对基因组DNA无明显影响, 80 mg/L鲎素能导致DNA断裂; 凝胶阻滞电泳显示鲎素也能与基因组DNA和RNA发生结合。【结论】研究结果为深入探讨鲎素抑杀大肠杆菌的分子机制提供重要的理论依据。

    • >微生物育种
    • 葡萄酒酿酒酵母嗜果糖特性的评价方法

      2013, 40(6):1027-1032.

      摘要 (1325) HTML (0) PDF 591.45 K (2895) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】酿酒酵母的嗜果糖性是葡萄酒酵母选育工作的一项重要内容。建立评价菌体发酵果糖能力的方法, 是葡萄酒酿酒酵母嗜果糖性研究的基础。【方法】以3株不同果糖发酵能力的酵母菌为研究对象, 考察菌体在模拟葡萄汁培养基条件下, 发酵情况与单糖利用之间的关系; 并通过数学方程拟合单糖动力发酵曲线, 得到发酵持续时间、葡萄糖浓度拟为0时的果糖浓度、果糖与葡萄糖曲线面积的差值等参数。【结果】这些参数可以反应出菌体的发酵速率和嗜果糖性。其中后两个参数能显著将3个菌株的嗜果糖特性区分开。【结论】为高果糖利用优良葡萄酒酿酒酵母菌株的筛选和构建, 提供了较为全面、客观和有效的评价方法。

    • >药物微生物学
    • 产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件优化

      2013, 40(6):1033-1040.

      摘要 (1505) HTML (0) PDF 571.36 K (2469) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】通过优化内生真菌枝状枝孢霉MD2的发酵条件, 提高10-去乙酰巴卡亭III (10-DAB)和紫杉醇(Taxol)的产量。【方法】采用单因素试验分析不同的培养基初始pH值、培养温度、摇床转速和培养时间对10-DAB和紫杉醇产量的影响, 优化枝状枝孢霉MD2的培养条件; 以YES为基本培养基, 采用单因素试验和正交试验分析添加苯甲酸钠、苯丙氨酸、丝氨酸和甘氨酸4种前体物对10-DAB和紫杉醇产量的影响, 优化枝状枝孢霉MD2的培养基组分。【结果】优化后发酵条件为: 在初始pH为5.0的300 mL YES培养基中, 添加15 mg/L苯甲酸钠、25 mg/L苯丙氨酸、5 mg/L丝氨酸、15 mg/L甘氨酸, 接种1 mL枝状枝孢霉MD2的孢子悬液(107?108个孢子/mL), 28.0 °C、220 r/min发酵培养12 d。在此条件下, 枝状枝孢霉MD2的生物量、10-DAB和紫杉醇的产量分别为15.5 g/L、471.5 μg/L和569.5 μg/L, 与初始发酵条件相比, 分别提高了1.3、3.6和3.4倍。【结论】首次获得了枝状枝孢霉MD2生产10-DAB和紫杉醇的较适摇瓶发酵条件, 可为进一步放大发酵培养提供参考。

    • >医学微生物学
    • 牙菌斑培养菌群宏基因组文库构建及抗生素耐药基因筛选

      2013, 40(6):1041-1048.

      摘要 (1423) HTML (0) PDF 1.59 M (2751) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】构建牙菌斑培养菌群宏基因组文库, 筛选牙菌斑生物膜中细菌的抗生素耐药基因。【方法】采集20例无龋健康人的集合牙菌斑并进行厌氧培养。提取牙菌斑培养菌群宏基因组构建Fosmid文库。用卡那霉素、四环素及氨苄西林对文库进行筛选, 并对筛选到的抗性Fosmid克隆进行末端测序、亚克隆构建、亚克隆测序和序列分析。【结果】构建了牙菌斑培养菌群宏基因组Fosmid文库, 插入片段长度在36?48 kb间约有15?120个克隆, 插入片段长度小于36 kb的约有3 360个克隆。筛选获得一个氨基糖苷类双功能修饰酶AacA-AphD基因、一个核糖体保护蛋白型四环素耐药基因tet (M)及一个C家族b-内酰胺酶基因。【结论】证实了可以通过构建宏基因组文库的方法来筛选牙菌斑培养菌群中的抗生素耐药基因。

    • 白念珠菌铁通透酶基因CaFTH1的功能研究

      2013, 40(6):1049-1057.

      摘要 (1349) HTML (0) PDF 56.56 M (1705) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】白念珠菌CaFTH1是一种铁通透酶编码基因。为了研究CaFTH1对胞内铁代谢和液泡功能的影响, 构建fth1?/?单基因缺失菌株和fth1?/?fet33?/?双基因缺失菌株。【方法】利用生物信息学软件对CaFTH1进行序列比对和分析; 通过实时荧光定量PCR技术研究铁离子丰度对CaFTH1表达的影响; 利用PCR介导的同源重组方法构建基因缺失菌株; 利用原子吸收光谱方法测定基因缺失菌株胞内铁含量的变化, 并对基因缺失菌株在缺铁条件和菌丝诱导条件下的生长状况进行研究; 通过代谢转换实验, 研究CaFTH1对细胞液泡功能的影响。【结果】序列比对结果表明白念珠菌CaFth1蛋白属于铁通透酶Ftr1超家族, 与酿酒酵母液泡膜蛋白ScFth1具有最高的同源性。铁匮乏条件会诱导CaFTH1的表达, 而富铁条件则会抑制其表达。白念珠菌CaFTH1的缺失会导致胞内铁含量的降低, fth1?/?突变菌株基础上CaFET33的缺失则会进一步降低胞内铁含量。在缺铁条件下, fth1?/?fet33?/?双基因缺失菌株在一定程度上表现出代谢转换能力的缺陷。另外, 在某些固体菌丝诱导培养条件下, fth1?/?fet33?/?缺失菌株菌落表面形成褶皱能力显著增强; 而在液体菌丝诱导条件下, 则表现为增强的菌丝聚集能力。【结论】CaFTH1是一种低铁应答基因, 在维持白念珠菌胞内铁离子稳态及液泡功能方面具有重要作用。CaFTH1和CaFET33基因的双缺失会对白念珠菌的菌落形态和菌丝聚集产生影响。

    • 荚膜唾液酸对猪链球菌激活巨噬细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路影响的研究

      2013, 40(6):1058-1067.

      摘要 (4306) HTML (0) PDF 15.50 M (11099) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】探索猪链球菌2型感染后单核/巨噬细胞启动信号转导通路机制, 探讨荚膜唾液酸对细菌激活巨噬细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路的影响。【方法】以小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象, 采用RT-PCR、Western blotting、免疫荧光和ELISA法分别检测猪链球菌2型野毒株、唾液酸缺失突变株、唾液酸回复突变株感染后不同时间点巨噬细胞TLR2 mRNA转录水平、AKT磷酸化水平、NF-κB激活程度以及前炎症因子TNF-α分泌水平; 再分别用TLR2阻断剂和PI-3K抑制剂预处理巨噬细胞, 检测上述分子的表达水平。【结果】唾液酸缺失株可选择性的活化信号转导通路途径。RT-PCR结果表明, 缺失株TLR2 mRNA表达水平自1 h开始升高, 1.5 h达高峰后有所下降; Western blotting显示, 缺失株TLR2蛋白表达水平7 h达高峰, 9 h下降; p-AKT 水平1.5?5 h持续稳定在高峰水平, 7 h后开始下降; 免疫荧光可见15 min NF-κB激活-核转运程度较高; ELISA结果显示, 10 h之后TNF-α的水平显著高于野生株和回复株。使用TLR2阻断剂和PI-3K抑制剂, 三菌株通路活化程度均明显受抑制。【结论】荚膜唾液酸可抑制宿主免疫细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路的激活, 藉此参与细菌逃避宿主的免疫防御作用。

    • >简报
    • 海洋细菌SSQ500的鉴定及其发酵产物抗肿瘤作用机制研究

      2013, 40(6):1068-1073.

      摘要 (1428) HTML (0) PDF 1.42 M (2257) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】对具有抗肿瘤活性的海洋细菌SSQ500进行分类鉴定, 初步探讨其发酵产物的抗肿瘤作用机制。【方法】通过菌株的形态学观察、生理生化特征检测和16S rDNA序列分析及系统发育分析, 以确定菌株的分类。不同浓度的活性物质作用于肿瘤细胞不同时间后收集细胞, 流式细胞术分析人肝癌细胞(SMMC-7721)凋亡比例, 检测Caspase3、Caspase8蛋白的表达。【结果】初步鉴定菌株SSQ500属于粘球菌属(Myxococcaceae sp.)。该菌株发酵产物能诱导SMMC-7721凋亡, 上调Caspase3、Caspase8蛋白的表达。【结论】SSQ500属于粘球菌属, 其发酵产物的抗肿瘤作用机制为诱导肿瘤细胞凋亡, 可能与上调Caspase3、Caspase8蛋白的表达有关。

    • ELP[I]50标签在重组硫氧还蛋白分离纯化中的应用及PEG对其相变温度的影响

      2013, 40(6):1074-1079.

      摘要 (1364) HTML (0) PDF 4.76 M (2376) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】使用自行设计的类弹性蛋白(Elastin-like protein, ELP) ELP[I]50作为非色谱纯化标签, 分离纯化重组硫氧还蛋白(Thioredoxin, Trx), 并研究聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG)对ELP[I]50-Trx相变温度(Inverse temperature transition, Tt)的影响。【方法】人工合成Trx基因, 将其亚克隆到自行构建的表达载体pET28编码ELP[I]50标签下游, 转入大肠杆菌BLR(DE3)进行表达。融合蛋白表达后, 采用可逆相变循环(Inverse transition cycling, ITC)分离纯化, 并检测不同浓度PEG时的Tt值。【结果】成功表达、分离纯化出融合蛋白ELP[I]50-Trx, 检测出该蛋白浓度为25 μmol/L时, Tt为28.6 °C; 而当PEG的浓度为5%、10%、15%、20%时, Tt分别降至22.3 °C、15.9 °C、6 °C、0 °C。【结论】ELP[I]50标签高效纯化重组蛋白具有操作简便、成本较低、易于扩大的优势, 而PEG能降低蛋白的Tt值, 进一步增强分离纯化效果, 扩大使用范围, 可望应用于分离纯化多种重组蛋白。

    • 南京市2011年乙型流感血凝素基因分子特征分析

      2013, 40(6):1080-1086.

      摘要 (1474) HTML (0) PDF 53.24 M (1351) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】分析2011年南京市乙型流感病毒的血凝素(HA)分子学特征。【方法】选择7株2011年南京市不同时间段有代表性的乙型流感毒株进行HA基因序列测定, 通过生物信息学方法对HA分子学特征进行分析。【结果】7株乙型流感毒株分为两个系, 4株为Victoria, 3株为Yamagata; 与2011年度疫苗株相比, Victoria和Yamagata系毒株分别在抗原位点146、197和116、198发生了氨基酸替换; 其中197和198位点分别是Victoria和Yamagata毒株的受体结合位点, 由于上述位点的替换使得Victoria系/Yamagata系毒株分别在197/196位增加了一个潜在的糖基化位点。【结论】2011年南京市乙型流感Victoria系和Yamagata系病毒同时存在, Victoria/Yamagata毒株197/198位点的氨基酸替换, 值得做进一步的探讨。

    • >专论与综述
    • “香料皇后”——天然香兰素生物合成的研究进展

      2013, 40(6):1087-1095.

      摘要 (1486) HTML (0) PDF 4.11 M (4234) 评论 (0) 收藏

      摘要:香兰素是世界上最重要的香料之一, 广泛应用在食品饮料、香精香料和医药工业等领域中, 全球每年的需求量超过16 000 t。鉴于人们对纯天然绿色食品的追求日益增长, 天然香兰素高效的生产方法也成为研究的热点。通过对各种香兰素生产方法的比较, 明确提出微生物合成方法的主导地位, 综述了香兰素的生物合成途径以及合成关键基因和酶等方面的研究进展, 分析探讨了不同生物合成途径的优劣之处, 并展望了利用微生物高产天然香兰素存在的瓶颈以及有潜力的发展方向。

    • >生物实验室
    • 基于多种微生物的毒性检测MTOXPlate冻干板制备及优化

      2013, 40(6):1096-1107.

      摘要 (1284) HTML (0) PDF 784.16 K (2636) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】制备基于多种微生物的生物毒性检测MTOXPlate冻干板, 从而简化操作程序, 使其能更灵敏、方便、快速地进行生物毒性测试。【方法】采用真空冷冻干燥法将指示微生物固定在微孔板中。以存活率为指标, 利用荧光分光光度法确定冻干保护剂的组成。通过分析毒性响应灵敏度对检测条件进行优化。【结果】MTOXPlate的冻干保护剂组成为8%海藻糖、2%葡萄糖、2%甘露醇、1%谷氨酸钠。在此组成下, 11株菌株的平均存活率最高, 可达89.41%。复活介质与测试样品同时加入, 在缩短了测试时间的同时也提高了检测灵敏度。该冻干板具有良好的灵敏度和重现性, 能较好地满足污染物生物毒性测试的需要。【结论】MTOXPlate冻干板可作为一种新型的生物毒性测试技术, 在生态毒理检测领域推广应用。

    • >主编点评
    • 高温放线菌的多样性

      2013, 40(6):1108-1108.

      摘要 (1342) HTML (0) PDF 238.94 K (1788) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >主编点评文章
    • 云南干热环境可培养高温放线菌多样性及产纤维素酶活性评价

      2013, 40(6):1109-1120.

      摘要 (1592) HTML (0) PDF 1.16 M (2427) 评论 (0) 收藏

      摘要:【目的】探索云南东川干热河谷、元谋土林以及昆明周边高温堆肥、热泉等环境可培养高温放线菌的多样性及其产纤维素酶的潜力。【方法】利用稀释涂布平板法从采集于上述环境的样品中分离得到菌株500余株, 通过形态去重复后对300余株进行16S rRNA基因测序分析, 并对获得的菌株利用刚果红染色的方法进行纤维素酶活性初步筛选。【结果】分离到的菌株共分布于放线菌纲下9个亚目15个科33个属, 其中候选新属2个、候选新种3个。451株菌的纤维素酶筛选结果显示57%具有纤维素酶活性, 其中链霉菌、小单孢菌、野野村氏菌在纤维素酶活性菌株中占较大比例。【结论】云南干热环境下蕴含着丰富的放线菌资源, 纤维素酶初步筛选显示出了良好的降解活性, 为下一步的深入研究提供良好的菌源。

    • >回顾点评
    • 产β-甘露聚糖酶内生菌

      2013, 40(6):1121-1122.

      摘要 (1062) HTML (0) PDF 274.12 K (1846) 评论 (0) 收藏

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