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摘要:【目的】分析普通包装和气调包装(65% O2和35% CO2)生鲜冷却牛肉在贮藏(4 °C)过程中的微生物多样性。【方法】通过16S rDNA V3区PCR-DGGE (变性梯度凝胶电泳)方法和16S rDNA克隆分析法研究生鲜冷却牛肉中微生物菌落结构及菌相变化规律。【结果】初始菌相主要有嗜冷杆菌属(Psychrobacter)和假单胞菌属(Pseudomonas)。贮藏过程中, 普通包装和气调包装生鲜冷却牛肉中优势菌均为Brochothrix和Pseudomonas。气调包装冷却牛肉中细菌种类较少, 两种包装生鲜牛肉在贮藏前期菌相变化明显。【结论】不同包装冷却牛肉中微生物菌落结构有较大差异, 气调包装中CO2对Pseudomonas等细菌起到了一定的抑制作用。

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摘要:【目的】从连云港高公岛沿岸海底泥样中分离筛选到一株产黑色素的海洋放线菌。【方法】对筛选得到的菌株HT-18所产的色素进行紫外-可见吸收光谱、红外光谱分析。通过形态特征、培养特征、生理生化测定以及16S rRNA序列的系统发育学分析确定菌株HT-18的分类学地位。采用单因素对产色素发酵条件进行优化。【结果】菌株HT-18所产色素为黑色素。鉴定该菌株属链霉菌属(Streptomyces)。最佳产色素条件为: 初始pH 7.0, 装液量为70/250 mL, 温度31 °C, 发酵时间为3 d。【结论】海洋链霉菌HT-18是一株具有研究和应用潜力的产黑色素菌株。

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摘要:【目的】利用筛选培养基, 从福建沿海潮间带泥样中分离筛选产壳聚糖酶的菌株, 并研究菌株的产酶特性。【方法】通过形态学观察, 结合26S rDNA序列进行分类鉴定, 采用DNS法测定酶活力。【结果】筛选得到产壳聚糖酶的菌株KQ-1002与草酸青霉(Penicillium oxalicum)的同源性为99%, 并初步鉴定为青霉属的一种。发酵培养的最适温度为30 °C, 最适碳源为1.0%水溶性壳聚糖, 最适氮源为1.87% (NH4)2SO4, 最适pH为6.0。该菌株液体发酵培养72 h产壳聚糖酶活性最高, 经优化后最高产酶量为18 U/mL。纯化后的壳聚糖酶经SDS-PAGE分析其分子量约40 kD。酶促反应最适pH为5.0, 最适反应温度为55 °C, Km值为1.293 g/L。在离子浓度为1.0×10?3 mol/L时, 金属离子Cu2+、Hg2+、Ag+对酶的活性均有强烈的抑制作用。壳聚糖酶对不同底物及脱乙酰度的壳聚糖具有不同的降解作用。【结论】筛选获得产壳聚糖酶的真菌菌株KQ-1002的壳聚糖酶活力经优化后提高了约7倍, 是一株具有研究和应用潜力的产壳聚糖酶菌株。

摘要:【目的】筛选樱桃[Cerasus pseudocerasus (Lindl.) G. Don]生物肥料中应用的优良菌株资源。【方法】通过保绿法和萝卜子叶增重法, 结合定量检测细菌分离物产植物激素的能力, 从樱桃根际土壤中筛选具有良好应用潜力的细菌分离物。利用盆栽试验, 验证其促生效果。对促生效果较好的细菌分离物, 进行形态学观察、生理生化测定、16S rRNA基因序列及系统发育树分析以确定其分类地位。【结果】筛选出4株具有良好应用潜力的细菌分离物, 盆栽试验结果表明: AI5、AI21、PII17、PI7, 尤其是PII17, 显著提高樱桃根系及地上部生物量, 对樱桃生长有明显的促进作用。分类鉴定结果显示: AI5、AI21为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus), PII17为假单胞菌属(Pseudomonas sp.), PI7为肠杆菌属(Enterobacter sp.)。【结论】AI5、AI21、PII17、PI7, 尤其是PII17, 对樱桃生长有明显的促进作用, 在生物肥料的生产中具有广阔的应用前景。

摘要:【目的】从疑似鸭疫里默氏杆菌病的病死雏鹅分离病原菌进行鉴定。【方法】根据细菌培养特性、生化特性、动物试验、血清型鉴定及分子生物学特性对分离菌株进行鉴定。【结果】分离菌株为革兰氏阴性菌, 不发酵糖类和醇类, 尿素酶试验和氧化酶还原试验为阳性, 致病, 不同分离株的16S rRNA基因经多重序列比对分析, 结果显示鹅源分离株与鸭源鸭疫里默氏杆菌处于同一进化支上, 与鸡源鸭疫里默氏杆菌进化关系稍远, 血清型鉴定为1型。【结论】分离菌株为血清1型的鸭疫里默氏杆菌, 对鸭和鹅均有高致病性, 自家疫苗能够较好地保护雏鹅。

摘要:【目的】应用柱前衍生化高效液相色谱法筛选产1-脱氧野尻霉素(DNJ)菌株, 并对其进行系统鉴定。【方法】利用芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)柱前衍生化高效液相色谱法筛选DNJ产生菌; 通过形态特征、培养特征、生理生化特征以及16S rRNA 序列相似性分析等多项分类方法对DNJ产生菌进行鉴定; 在10 L发酵罐水平进行发酵研究, 利用FMOC-Cl柱前衍生化高效液相色谱法测定DNJ含量。【结果】从80株具有α-糖苷酶抑制剂活性的土壤放线菌中筛选得到一株DNJ产生菌, 菌株编号为PW409, 初步确定为戈壁三素链霉菌(Streptomyces gobitrici); 发酵研究表明, DNJ为链霉菌PW409的次级代谢产物, 发酵液中DNJ浓度为12.1 mg/L。【结论】首次将FMOC-Cl柱前衍生化高效液相色谱法应用于DNJ产生菌的筛选, 并首次报道从戈壁三素链霉菌发酵液中鉴定到DNJ。

摘要:【目的】对印度洋卡利安达岛海洋热泉周边的高温海藻床中的微生物进行分离培养和16S rDNA种属鉴定, 并研究其耐热和耐盐特性。【方法】采集海藻床中马尾藻、沉积物和海水样品, 采用MGYTC培养基, 分别于55 °C和30 °C对样品中的微生物进行培养和分离纯化; 采用16S rDNA鉴定种属并构建进化树; 研究培养温度和盐度对几种菌株生长的影响。【结果】共获得4个纲、9个属的12种菌株, 与已知种属的相似度高于98%。芽孢杆菌纲嗜热放线菌科2个属的菌株和芽孢杆菌属菌株在55 °C培养时获得, 为嗜热菌株; 其中高温放线糖莱斯菌(Laceyella sacchari)和热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans)可以在0?90的盐度范围生长。γ-变形菌纲希瓦氏属的Shewanella upenei、Shewanella algidipiscicola和鲍希瓦氏菌(Shewanella haliotis)可适应30 °C?55 °C的生长环境。【结论】研究获得的菌株, 具有耐热、耐盐或对温度适应范围广等特性, 有望成为生物技术领域的新资源; 分离获得的Tepidibacter formicigenes, 深海微小杆菌(Exiguobacterium profundum)和魔鬼弧菌(Vibrio diabolicus)曾被报道来源于深海热液区, 这对于阐明海洋热泉与深海热液环境的内在联系提供了参考。

摘要:【目的】根据鸡β-防御素7 (Gal-7)的成熟肽基因序列合成基因, 构建表达Gal-7的大肠杆菌工程菌, 研究重组鸡防御素Gal-7成熟肽的体外生物活性。【方法】将合成的gal-7基因克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-6p-1中, 得到重组质粒pGEX-6p-gal7, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 经IPTG诱导表达得到含GST标签的融合蛋白GST-Gal7; 之后用Prescission蛋白酶将GST标签切除, 并对成熟肽进行质谱分析; 再利用琼脂打孔扩散法检测Gal-7成熟肽的体外抑菌活性, 用2倍稀释法测定对指示菌的最低抑菌浓度。【结果】成功构建Gal-7大肠杆菌异源表达工程菌, 表达纯化的重组Gal-7成熟肽质谱鉴定分子量为5 516 D, 其对黄色微球菌(NCIB 8166)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、粪肠链球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(CMCC 44102)均有抑菌活性, 最低抑菌浓度分别为16.875、67.5、67.5、135 mg/L。【结论】获得表达鸡Gal-7成熟肽的大肠杆菌工程菌, 并且切除GST标签的Gal-7成熟肽具有生物活性。

摘要:【目的】确立蛹拟青霉深层培养液中高纯度、高纤溶活性纤溶酶的分离纯化方法并测定其酶学性质。【方法】采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对蛹拟青霉纤溶酶进行分离。用Lowry法测定蛋白质浓度, 纤维蛋白平板法测定其纤溶活性, SDS-PAGE鉴定其纯度并确定其分子量, IEF法测定其等电点。【结果】研究发现, 以蔗糖和豆饼为培养基主要基质时, 蛹拟青霉深层培养可以产生至少两种纤溶酶。提纯后的纤溶酶Ⅱ比活力达到800.46 U/mg, 总纯化倍数为30.07倍。纤溶酶Ⅱ的相对分子量和等电点分别为32 kD和9.3±0.2。纤溶酶Ⅱ是一种糖蛋白, 总含糖量为0.98% (w/v)。该酶可以顺次降解人血纤维蛋白(原)的α、β和γ链。其最适作用pH及温度分别为7.4和41 °C。Aprotinine与PMSF对该纤溶酶的活性完全抑制, 推测此纤溶酶可能是一种丝氨酸蛋白酶。【结论】单一的高纤溶活性纤溶酶的获得和酶学性质的确定，为该酶开发成为新型溶栓药物提供了理论依据。

摘要:葡萄球菌呼吸相关双组分系统SrrAB能感应外界O2浓度, 并将信号传至胞内, 调控下游基因的转录, 以应对外界环境的变化。有研究表明, 金黄色葡萄球菌SrrAB在有氧条件下促进毒力因子的表达, 抑制生物膜的形成; 在厌氧条件下抑制毒力因子的表达, 促进生物膜的形成。另外, 在有氧及厌氧条件下, 金黄色葡萄球菌SrrAB调控生长代谢的途径也不一致。表皮葡萄球菌中也存在类似的双组分系统SrrAB, 且与金黄色葡萄球菌SrrAB具有较高同源性, 但目前尚不清楚两者在生长代谢及毒力调控方面的异同。结合课题组研究工作, 简要综述葡萄球菌SrrAB的调控机制, 着重比较其在有氧及厌氧条件下的调控差异, 这对临床诊治葡萄球菌引起的感染具有一定的借鉴意义。

摘要:苯甲酸在工业中的广泛应用使其成为环境中的常见污染物, 对微生物好氧降解苯甲酸的邻位途径、间位途径、龙胆酸途径和原儿茶酸途径及厌氧降解途径等进行总结, 并对苯甲酸降解过程中发挥重要作用的苯甲酸双加氧酶的种类、不同组分及苯甲酸降解基因和调控基因的基因簇进行介绍, 同时展望微生物降解污染物的发展方向。

摘要:配合医学微生物学科实验教学改革的实施, 建立以实验全过程管理为基础, 以合理评价指标为核心, 以科学评价学生综合实验能力为目标的实验考核评价体系。分层次考核学生的基本技能掌握情况、科学的实验思想, 及综合性探究性实验的能力。通过调查表及访谈结果可以看出, 考核评价体系能够科学地反映学生的实验能力、综合能力, 具有传统的实验考核评价体系不可比拟的优越性。

摘要:探讨以注重综合素质、强化工程能力和工程素质的培养、完善知识结构为重点的生物工程专业核心课程的教学改革。阐明生物工程师应具备的以五种能力和五种意识为核心的工程素质内涵, 明确培养工程素质实施的核心课程; 充分利用产学研平台, 建设素质精良的“双师型”教师队伍; 以工程能力培养为主线, 建立以生物工厂设计和工艺改进的教学特色课程群; 实施启发式、分组讨论法、比较归纳法和案例式的教学方法改革, 提高了教学效果, 强化了生物工程专业学生工程素质的培养。

摘要:【目的】建立一种快速简单检测水霉病病原菌的方法。【方法】针对水霉菌ITS区基因序列设计4条特异性引物, 包括两条外引物和两条内引物, 优化反应条件, 观察检测结果。对该方法的特异性和敏感性进行研究。【结果】建立了环介导等温扩增技术检测水霉菌的方法, 确定了其最适反应条件。该方法能够检测到浓度低至103个/mL的水霉菌孢子, 其灵敏度是普通PCR方法的100倍。【结论】建立的检测水霉菌的LAMP技术, 具有操作简便快速等特点, 可用做特异性水霉及其孢子的快速鉴定。

摘要:【目的】应用傅立叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy, FT-IR)技术对两株不同来源的大肠杆菌进行鉴别。【方法】用FT-IR技术对两株不同来源的大肠杆菌进行指纹图谱数据采集, 用化学计量学分析方法对光谱进行分析。【结果】建立了基于主成分分析(Principal component analysis, PCA)和分级聚类分析(Hierarchical cluster analysis, HCA)两种聚类分析模型, 均可将两株大肠杆菌进行成功区分。【结论】傅立叶变换红外光谱分析方法简便、快速、易操作, 结果重现性好, 可用于区分不同来源的同种细菌。