摘要:

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摘要:【目的】从海洋环境中筛选出能有效抑制细菌群体感应的活性菌株, 为以致病菌群体感应为靶点的新型疗法提供新的天然产物资源。【方法】以紫色杆菌(Chromobacterium violaceum)为报告菌, 采用滤纸片法和双层软琼脂法相结合的筛选模型进行群体感应抑制活性菌的筛选。【结果】通过对美国圣璜岛海域海绵中分离出来的272株海洋细菌群体感应抑制活性的筛选, 得到了具有抑制紫色杆菌素产生的细菌51株, 其中74号菌株抑制效果最好, 具有进一步研究的价值。【结论】海洋细菌中有很多具有抑制细菌群体感应效应的菌株, 是天然群体感应抑制剂的潜在来源。

摘要:【目的】研究有机溶剂胁迫处理对菌株分泌胞外多糖的影响并确定最佳条件。【方法】利用分泌抗氧化活性胞外多糖海洋细菌Bacillus subtilis OST23a及其突变菌株UD292为出发菌株, 在考察菌株有机溶剂耐受性的基础上, 测定不同浓度正己烷胁迫处理不同时间后该菌株抗氧化胞外多糖产量。【结果】结果表明最佳胁迫处理浓度和时间分别为3%和6 h, 此时Bacillus subtilis OST23a和菌株UD292胞外多糖分泌量分别从9.02 mg/L 和43.92 mg/L显著提高到52.97 mg/L和201.81 mg/L, 且胞外多糖的抗氧化性能无显著变化。Bacillus subtilis OST23a和菌株UD292连续传代试验结果表明菌株遗传性状较稳定。【结论】有机溶剂胁迫可以提高细菌分泌胞外多糖的能力, 在微生物育种方面有潜在的应用。

摘要:【目的】分离、保护油藏嗜热微生物资源, 解析其主要的代谢特征。【方法】利用Hungte厌氧分离技术从大港油田埕海一区油层采出液中分离出厌氧菌株BF1。通过生理生化特征分析、16S rRNA基因序列比对与电化学分析, 确定BF1的分类地位及其S元素代谢对腐蚀电流的影响。【结果】菌株BF1为严格嗜热厌氧革兰氏阴性杆菌, 顶端产芽孢、不运动, 菌体大小为0.42 μm×(1.6?5.4) μm, 单生、成对或成串生长。其温度生长范围为45 °C?75 °C (最适温度60 °C); pH生长范围在4.5?8.5 (最适pH 6.5) 之间, 比生长速率(μm) 0.99 h?1, 倍增时间为42 min。能利用葡萄糖、松三糖、棉子糖、甘露糖、乳糖、纤维二糖、果糖、核糖等碳水化合物, 利用葡萄糖发酵的产物是乙醇、乙酸、CO2及少量的H2。菌株BF1能还原亚硫酸盐与硫代硫酸盐产生H2S, 其耐受上限分别为50 mmol/L和75 mmol/L; 还原硫代硫酸钠(50 mmol/L) 后其极化电阻由2 099 Ω/cm2降低至776 Ω/cm2, 腐蚀电流由9.936e-006 A提高至3.25e-005 A。细胞膜脂肪酸主要由高级饱和脂肪酸组成, 含量最丰富的为十五烷酸占70.6%。菌株BF1的DNA (G+C)mol%含量为34.0%, 其16S rRNA与Thermoanaerobacter pseudethanolicus DSM 2355T相似性最高, 为98.3%, 与T. brockii subsp. brockii DSM 1457T次之, 为98.0%。菌株BF1的许多生理、生化特征与T. pseudethanolicus DSM 2355T 和T. brockii subsp. brockii DSM 1457T有着明显的差别, 如倍增时间、最适生长温度及底物利用等; 而菌株BF1的细胞膜脂肪酸组成与T. pseudetha-nolicus DSM 2355T也不相同。【结论】菌株BF1可能是Thermoanaerobacter属中的一个新种, 其确切分类地位还需要进一步进行DNA分子杂交; 其代谢元素硫提高腐蚀电流密度, 可能会对油田管道与设备造成腐蚀。

摘要:【目的】比较不同红树林地区的老鼠簕内生放线菌的地理分布, 了解内生放线菌与其所处环境的相关性。【方法】分别从5个不同地点的红树林采集老鼠簕全株植物, 采用9种分离培养基, 从植株不同部位分离内生放线菌, 用16S rRNA基因序列分析鉴定到属, 用添加不同NaCl浓度的ISP 2液体培养基进行耐盐度测试, 用无氮基础培养基进行固氮活性测试。【结果】共分离得到内生放线菌52株, 其中从叶、茎和根部分别获得5株、2株和45株, 花和果中未分离到。52株内生放线菌分别属于小单孢菌属(47株), 链霉菌属(3株), 疣孢菌属(1株)和继生菌属(1株)。48株菌表现出耐盐或嗜盐特征, 其中18株最高耐盐度20%, 4株不能在无盐条件下生长, 12株菌可在含有3.3% NaCl的培养基上生长良好。4株菌可在无氮培养基下生长。【结论】对47株内生小单孢菌的地理分布分析表明, 老鼠簕内生小单孢菌的类群因不同地理位置有很大差异。耐盐和固氮活性测试结果表明了老鼠簕内生放线菌对环境的适应性。

摘要:【目的】球孢白僵菌(Beauveria bassiana)和蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)是国内外目前研究应用最广泛的杀虫生防真菌, 欲扩大其防治范围、增强防治效果、降低生防成本。【方法】采用共发酵技术, 通过组合菌株产孢能力和杀虫毒力比较试验, 确定蜡蚧轮枝菌和球孢白僵菌共发酵的可行性。【结果】蜡蚧轮枝菌L-31和球孢白僵菌Q-55共发酵的最佳配比为1:1时, 按10%总量接种于发酵培养液中(培养液按酵母膏5.0 g/L、葡萄糖20.0 g/L、麦芽糖提取物 5.0 g/L、KH2PO4 3.0 g/L、黄小米200.0 g/L, pH 6.5 配制), 23.0 °C±0.1 °C恒温静置发酵12 d, 共发酵液的含孢量可达1×109 CFU/mL以上, 杀虫毒力比较强, 其对温室白粉虱和菜青虫可同时显效, 处理9 d后的致死中浓度LC50分别为2.09×104±0.12 CFU/mL和3.17×105±0.11 CFU/mL, 发酵液浓度为1×108 CFU/mL时的致死中时间LT50分别为2.11±0.14 d和4.27±0.43 d, 温室小区试验校正防效在80%以上, 与其各单一菌株发酵液的防效之间存在显著性差异。【结论】通过两株生防真菌的共发酵研究, 为杀虫真菌的扩谱增效以及植物害虫的有效防治提供科学依据和有效途径。

摘要:【目的】鉴定从新疆棉花秸秆高温堆肥中分离出的两株耐热真菌Z1、Z2的属种, 并通过优化影响菌株产生纤维素酶的因素来提高菌株对秸秆的降解率。【方法】经形态学和菌株的ITS区克隆与序列分析确定属种, 以液体摇瓶发酵产滤纸酶活性(FPA)变化为衡量指标, 对Z1、Z2以及二者混合菌(MS)的纤维素酶产生条件进行优化。【结果】菌株Z1为曲霉属烟曲霉(Aspergillus fumigatus Fresen), Z2为蚀丝霉属(Myceliophthora Cost.)。确定Z1以棉秸秆为碳源、以NaNO3为氮源、起始pH 9.5、接种量11%、50 °C摇床培养10 d, 对棉秸秆降解率为10.19%; Z2以麦秸秆为碳源、以NaNO3为氮源、起始pH 5.5、接种量9%、50°C摇床培养10 d, 对麦秆降解率为27.50%; MS以棉花秸秆为碳源、以蛋白胨为氮源、起始pH 5.5、接种量11%、50°C摇床培养10 d, 对棉秸秆的降解率为53.45%。【结论】实验表明, MS (Z1、Z2混合)对秸秆的降解效果优于单株菌, 降解率达到一半以上, 两株耐热真菌在降解棉花秸秆、小麦秸秆等农作物废弃秸秆中具有较高的应用价值。

摘要:【目的】在原核表达体系中实现大肠杆菌来源的喹啉酸磷酸核糖转移酶(Quinolinic acid phosphoribosyl transferase, QPRT)和烟酸磷酸核糖转移酶(Nicotinic acid phosphoribosyl transferase, NaPPT)的表达与纯化，并利用酶的生物催化作用实现2,3-二羧酸喹啉的2位选择性脱羧得到烟酸。【方法】通过PCR扩增分别得到编码QPRT和NaPPT的基因片段, 构建成原核表达质粒pET28a-NadC和pRSETB-PncB, 在Escherichia coli (E. coli)中对其进行表达，在体外对目标蛋白进行纯化并利用高效液相色谱法(HPLC)检测酶催化反应的发生。【结果】成功表达纯化得到QPRT和NaPPT, 检测结果表明在这两个酶的生物催化作用下可实现喹啉酸的2位选择性脱羧。

摘要:【目的】高效提取香菇中的功能性成分, 进一步开发利用香菇的食用价值。【方法】以香菇为原料, 在单因素试验和正交试验的基础上, 研究了复合酶法(纤维素酶、木瓜蛋白酶和5'-磷酸二酯酶)水解香菇的工艺条件。【结果】第一步为纤维素酶和木瓜蛋白酶共同水解, 加酶量分别为0.2%和0.4%, 水解温度55 °C, 水解时间3 h, 初始pH 5.5; 第二步为5'-磷酸二酯酶水解, 加酶量为0.2%, 水解温度70 °C, 水解时间2 h, 初始pH 7.0。用此法得到的香菇水解液水解度为39.48%, 游离氨基酸得率10.25%, 5'-核苷酸得率0.768%, 多糖得率8.67%。【结论】此香菇水解液富含呈鲜味物质和其它营养物质, 可进一步深加工为香菇调味品。

摘要:【目的】对烟曲霉Afu4g13170基因功能进行初步研究。【方法】利用Double-joint PCR方法和一步基因敲除技术, 构建Afu4g13170基因缺失突变株。【结果】序列比对表明烟曲霉Afu4g13170蛋白与构巢曲霉Ani04163蛋白和新型隐球菌Gib2蛋白的氨基酸序列相似性为88.6%; 表型分析表明基因破坏使突变株生长迟缓、梗基伸长、孢子分化能力下降, 产孢推迟、产孢量减少, 色素产生量降低; 色谱分析显示基因缺失突变株的产毒能力下降。【结论】烟曲霉Afu4g13170基因可以作为控制曲霉致毒的一个靶位点。

摘要:【目的】研究2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2, S. suis 2)野毒株05ZYH33的srtBCD菌毛岛菌毛亚蛋白SSU2100的免疫保护性作用。【方法】通过PCR扩增出SSU2100基因片段, 将目的基因克隆到表达载体pET28a上, 转化入E. coli BL21感受态中表达, 亲和层析法纯化目的蛋白; Western blot检测SSU2100蛋白的免疫原性, 重组蛋白免疫BALB/c小鼠, ELISA法检测多抗血清的效价及IgG亚型, 研究重组蛋白的免疫保护作用。【结果】在原核系统成功表达出了SSU2100蛋白; ELISA结果显示重组蛋白能够刺激小鼠产生高效价的免疫抗体; 动物实验表明该蛋白具有良好的免疫保护作用。【结论】菌毛亚蛋白SSU2100可以作为S. suis 2亚单位疫苗的候选分子, 为系统地阐释srtBCD菌毛岛在S. suis 2致病机制中的作用奠定基础。

摘要:【目的】通过培养RAW264.7细胞, 并运用siRNA沉默NOD2基因来研究NODs信号通路在体外抗烟曲霉中的作用。【方法】体外培养RAW264.7细胞, 接种2×105个/孔细胞于六孔板中, 分为正常对照组(N)和正常沉默组[NOD2(RNAi), 正常+烟曲霉孢子刺激组(N+Af)和正常沉默+烟曲霉孢子刺激组[NOD2(RNAi)+Af], 每组三复孔。通过RT-PCR法检测细胞中NOD1、NOD2、RIP2 mRNA表达; Western blot法检测细胞中分泌蛋白TNF-α表达。【结果】与N组比较, N+Af 组NOD1、NOD2 mRNA和TNF-α蛋白表达显著上升。与阴性对照组(Nctrol)相比, NOD2(RNAi)组NOD2 mRNA表达明显受到抑制, 沉默效果达到80% 以上, 说明RAW264.7细胞中NOD2基因被成功沉默。与NOD2(RNAi)组比较, NOD2(RNAi)+Af组NOD1、RIP2 mRNA和TNF-α蛋白表达小幅上升, 但无显著性差异(P>0.05)。与NOD2基因沉默前比较发现: 与N组比较, NOD2(RNAi)组, TNF-α蛋白表达显著性升高(P<0.05)。与N+Af组比较, NOD2(RNAi)+Af组, TNF-α蛋白显著性降低(P<0.05); NOD1、RIP2 mRNA在各组中表达均未见显著性差异。【结论】NODs信号通路在 RAW264.7细胞抗烟曲霉中发挥作用, 尤以NOD2的作用较突出。

摘要:病原菌对宿主致病是病原菌与宿主复杂相互作用的结果。病原菌与宿主相互作用可造成宿主在细胞、组织及器官不同水平的损伤。病原菌对宿主的致病性及毒力, 一方面在于病原菌, 另一方面在于宿主因素以及宿主与病原菌的相互作用。病原菌-宿主在细胞水平的相互作用是病原菌感染致病的重要环节。结合本课题组对猪链球菌的研究, 从黏附与定殖、侵袭、逃避与扩散等方面概述病原菌逃避宿主细胞防御的机制。

摘要:Potyvirus属于马铃薯Y病毒科Potyviridae, 是最大的植物病毒属, 给农业生产造成严重的经济损失。P3是Potyvirus属病毒中变异很大、功能较复杂的编码蛋白, 涉及到病毒复制、侵染、抗性及细胞间运动; P3-PiPo是P3编码框内新近发现的Potyvirus重要编码蛋白, 已证实它在病毒的细胞间运动中起着决定性的作用。对病毒蛋白功能的研究为该属病毒的研究发展提供重要的理论基础, 对Potyvirus侵染机制及抗病机理研究具有指导价值。

摘要:根据对不同层次和专业医学生实验室生物安全教学的实践和体会, 从教学指导思想、课程设置、考核评估等方面进行了总结, 并分析了教学过程发现的问题, 以期通过教学活动培养学生良好的实验室生物安全意识和素质。

摘要:针对学校、生源及课程特点, 探讨研究型教学模式对食品微生物学教学效果的影响。教学改革过程中, 强调学生创新能力和综合素质的培养, 注重理论教学、实验教学及课外科研活动的协调, 加强过程管理。教学实践表明, 研究型教学模式改变了学生学习方式, 提高了科研能力, 教学质量明显提高。

摘要:为培养学生的岗位职业能力, 实现与岗位零对接, 基因工程综合实训以工作任务为线索确定教学内容, 以产品生产流程为载体设计教学过程, 以职业能力为依据改革教学方法, 以发展性评价为手段, 强化技能形成。实践证明, “基因工程综合实训”教学改革, 有利于培养学生的动手能力和实践创新能力, 有利于促进以职业能力培养为核心的教育。

摘要:“酶工程”是生物工程专业的主干课程, 其主要内容是研究酶的生产和应用。结合课程教学实践, 从认真选择教材、优化教学内容, 改进教学方法和手段, 完善考核形式等方面对“酶工程”课程教学进行了初步探讨, 以期提高教学效果。

摘要:【目的】建立产油酵母筛选以及胞内油脂含量测定的简便方法。【方法】利用尼罗红与胞内油脂成分结合后在紫外光照射下发出荧光且荧光强弱与油脂含量相关的原理。通过在添加尼罗红的培养基中培养酵母, 并观察菌落荧光的方法对385株深海酵母进行产油脂菌株筛选, 利用26S rDNA D1/D2区序列分析方法对筛选获得的产油酵母菌株进行鉴定, 并以其中的一株高产油脂酵母(2A00015)为试验菌株, 建立了一套尼罗红染色快速测定油脂含量的方法。【结果】获得22株产油酵母, 其中油脂含量最高可达62.9%, 经分子鉴定后显示这22株酵母分别属于(Candida viswanathii)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)、季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)以及Rhodosporidium paludigenum酵母。尼罗红染色快速测定油脂含量方法的最佳检测条件为: 菌悬液OD600小于1.2, 尼罗红浓度0.5 mg/L, 染色时间5 min, 激发波长488 nm, 发射波长570 nm。该测定方法得到相对荧光强度与称重法得到油脂含量呈正相关性, R2=0.9637。