摘要:

摘要:本实验采用纯培养和免培养相结合的方法对来源于可可西里的一份土壤样品中的细菌多样性进行了初步研究。纯培养实验使用了6种分离培养基, 共得到细菌19株, 其中放线菌7株, 非放线菌细菌12株。这些菌株分别属于叶杆菌属(Phyllobacterium)、贪食菌属(Variovorax)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、小月菌属(Microlunatus)、原小单胞菌属(Promicromonospora)、韩国生工菌属(Kribbella)和芽孢杆菌属(Bacillus) 8个属。免培养分析采用基于通用引物PCR 扩增的细菌16S rRNA 基因文库的方法以及变性梯度凝胶电泳(DGGE)。16S rRNA基因文库分析结果表明, 该土壤样品细菌群落可划分为19个OTUs, 分属于5个不同纲, 优势顺序为β-Proteobacteria (75%), α-Proteobacteria (9%), γ-Proteobacteria (7%), Actinobacteria (7%), Firmicutes (2%)。变性梯度凝胶电泳分析表明, 该样品细菌多样性指数Shannon-wiener index为2.68, 表明其中微生物多样性较低, 这可能和其所处的极端环境有一定关系。比较纯培养和免培养的实验结果发现, 土壤中的一些优势细菌并没有被有效地分离, 需要在针对特定微生物设计特定培养基及培养条件进行选择性分离上做更多的探索研究。

摘要:

摘要:为考察生长调节剂对甾体微生物转化过程中菌体生长状况的影响, 利用沉降密度宏观定量表征菌体的形态和扫描电镜微观观测菌体形态相结合的方法, 描述了生长过程中菌体形态的变化。结果表明: 与未加调节剂的空白体系对照, 加调节剂体系菌体在各个生长时期均呈现出较小的沉降密度。通过SEM图像可以明显看出加调节剂体系菌体表面光滑, 长势丰满、挺拔, 生长状况优良。两种方法均表明调节剂的加入明显促进了菌体的生长。

摘要:基于ε-聚赖氨酸的抑菌活性, 以96微孔板为平台, 建立适合大规模样品快速分析的微孔板生物检测法。结果表明, 藤黄微球菌(Micrococcus luteus)为最适敏感指示菌, 当敏感指示菌初始浓度为107?108 CFU/mL, 培养时间为4 h时, ε-聚赖氨酸浓度在100.00?500.00 mg/L范围内与抑菌率呈较显著的线性关系(R2=0.997 5)。该方法不仅表现出良好的精密度和准确度, 与HPLC和甲基橙法的实验结果对比, 微孔板生物检测法的相对标准偏差(RSD)和相对偏差(RD)分别小于3.5%和3.0%, 说明该方法是一种与HPLC法有类似分析精度, 但能直接反映样品的抑菌活性, 且更适合大规模样品快速检测的方法, 可用于发酵过程中ε-聚赖氨酸产量的检测和突变株的高通量筛选。

摘要:恶臭假单胞菌扁桃酸消旋酶的Val22位于20 s环状结构上, 是与底物结合相关的氨基酸之一。其中Val被替换为Arg后酶活性下降了75.9%。除了酶与底物疏水作用减弱以外, 静电排斥作用增强也可能引起活性的下降。利用分子动力学模拟对酶与底物的米氏复合物进行分析, 结果表明: 突变后第22位氨基酸侧链与底物的静电势从0.036 kJ/mol升高至0.124 kJ/mol。这说明氨基酸侧链极性的改变增加了侧链与底物分子之间的静电排斥作用, 因而静电排斥作用也是导致突变体活性下降的原因之一。同时, 突变后系统势能增加了283 kJ/mol, 进一步证实了第22位氨基酸侧链极性和带电性质的改变导致酶与底物结合状态的势能增大, 从而引起活性大幅下降。因此, 将来对酶的结合口袋区域进行理性设计时, 除了考虑空间位阻效应外, 还需考虑疏水作用和静电作用。

摘要:玛珥湖是一类具有独特地质构造特征的火山口湖泊, 目前国内外对玛珥湖内微生物多样性的研究还鲜有报道。为了解具有典型玛珥特征的湖光岩湖泊中可培养浮游细菌的种群资源特征, 采用盒式PCR (BOX-PCR) 筛选技术, 通过通用贫营养和原位湖水培养基研究在冬夏两季各水层内获得的可培养细菌种群的差异。结果表明: 不同培养基在不同水层上表现的细菌数量的变化相一致, 为夏季的5 m>1 m>13 m, 冬季的1 m>5 m>13 m, 变形菌占据优势地位, 其它为放线菌、厚壁菌和拟杆菌; 两类培养基上所获培养菌BOX-PCR图谱的多样性相似, 但菌群结构不同; 而细菌多样性在季节上的变化表现为冬季高于夏季, 这与相关湖泊内细菌微生物多样性在夏季会发生减少的特点相似; 相同季节同一水层上不同培养基上获得的培养菌门类不同, 表明此类通用性培养基在培养该环境微生物中的局限。研究的结果为探讨此类型湖泊微生物多样性与环境的关系及分离该环境下特定微生物菌株提供参考。

摘要:纯培养条件下, 测定了十字花科植物萝卜(Raphanus sativus L.)种子、幼苗、根系分泌物及幼苗提取物对土生空团菌(Cenococcum geophilum Fr. (Cg))菌株CgSO1、CgSB2、CgO5、SPOP2 和Cg5#菌株生长的影响。结果表明供试Cg菌株与萝卜种子共培养, 或将萝卜根系分泌物和幼苗提取物加入到培养基中, 均促进了Cg菌丝生长。高温灭菌处理使萝卜根系分泌物和幼苗提取物对Cg菌株的促生作用更强, 而高温灭菌后的萝卜幼苗段对菌株生长影响不大。其中经高温灭菌处理的幼苗水提取物对5菌株的促生作用最大, CgSO1、CgSB2、CgO5、SPOP2和Cg5#每菌落的菌丝干重分别达到: 54.8、45.8、63.9、41.2和50.5 mg。

摘要:对一株新分离的、能以甲基对硫磷为唯一磷源生长的菌株——JMUPMD-2利用形态观察和rDNA ITS序列分析对JMUPMD-2进行鉴定; 用气相色谱法检测培养过程中甲基对硫磷浓度的变化, 确定甲基对硫磷降解速率。该菌株的rDNA ITS序列与米曲霉 (Aspergillus oryzae)的同源性为99%, 菌落形态和显微形态都与米曲霉特征相符, 因此鉴定为米曲霉; 以350 μg/L甲基对硫磷为唯一磷源和350 μg/L甲基对硫磷及1 g/L K2HPO4组成的混合磷源分别培养该菌株, 200 h后的分解量分别为189 μg/L及28 μg/L。该菌株的胞内提取液具有明显的甲基对硫磷降解酶活性。

摘要:本文运用PCR技术及克隆文库方法, 对一个实验室规模的喹啉降解反应器生物膜系统中的整合子进行了分析。结果表明, 在该反硝化喹啉降解反应器的生物膜群落中, 整合子携带着丰富多样的基因盒。主要为编码与抗生素耐药性相关的基因盒, 如氨基糖苷类耐药基因(aadA基因等), 也带有与工业废水环境发现的整合子中可能与芳香族化合物降解有关的基因(如FldF基因)。还有一些功能未知的基因。鉴于耐药性相关基因的广泛存在, 对该反应器中分离的优势菌株进行了耐药性分析。结果表明, 44.1%的菌株存在耐药性, 29.4%的菌株有多重耐药性。它们对4种抗生素的耐药率分别为: 氨苄青霉素29.4%、卡那霉素23.5%、氯霉素20.6%、链霉素23.5%。不存在抗生素选择压力环境的微生物群落中分离的群落优势菌株普遍具有抗生素耐药性, 而且群落基因组的整合子中携带多种抗生素抗性基因的基因盒。这一现象还未曾见报道, 其成因值得进一步研究。

摘要:对前期筛选得到的具有生防潜力的杀蜱真菌Beauveria bassiana AT17菌株进行相关生物学性状的研究, 建立一套规范的实验室培养的技术和方法, 同时对其液固双相发酵技术进行优化, 在于提供优质高效的生防材料, 为其真菌制剂的规模化生产提供实践和理论基础。通过采用单因素筛选方案对其最适基础培养基、温度、pH值、碳源、氮源、微量元素及液固双相发酵配方进行研究, 发现该菌株在PDA、PPDA、PDAY、SDAY、SMAY 5种培养基上均能较好生长, 在PDA上生长最快, 在PDAY上产孢量最大。温度对菌丝的生长和产孢影响显著, 25 °C菌丝生长最快, 且产孢量最大。B. bassiana AT17菌株在pH 4?10范围内均可生长, 在偏碱性环境内生长最快, 在pH 5?6的偏酸性环境内产孢量最大。综合评价真菌各项指标后, 葡萄糖和酵母粉为菌丝生长和产孢的最佳碳源和氮源, 固体物料麦麸+玉米粉+米粉与基础培养液3/4 SDAY按2:1均匀混合后, 添加0.05% K+可作为菌株固体发酵的最佳物料配方组合。

摘要:选择交城骏枣(Zizyphus jujube cv. Jiaocheng Junzao)作为分离内生细菌的材料, 从中共分离到18株内生菌株, 运用平板对峙法从中筛选出5株对大枣病原菌及部分植物病原菌有拮抗作用的内生细菌。抑菌试验结果表明: 筛选出的5株细菌对刺盘胞菌Colletotrichum gloeosporides、链格孢菌Alternaria alternata、尖孢镰刀菌Fusarium oxysporium、烟草赤星病菌Alternarial longipes、稻瘟病菌Pyricularia oryzae、人参立枯病菌Rhizoctonia solani、人参菌核病菌Sclerotinia schinseng和小麦根腐病菌Bipolaris sorokiniana均有一定的抑菌活性。对这5株内生细菌进行了形态特征观察和生理生化鉴定。

摘要:为了研究分离自内蒙古传统发酵乳制品——“焦克”的短乳杆菌KLDS1.0373所产细菌素的部分生物学特性(抑菌谱, 对酶、pH和温度的敏感性, 作用方式)。短乳杆菌KLDS1.0373发酵液经硫酸铵沉淀和葡聚糖凝胶纯化后, 测定其部分生物学特性, 并采用Tricine-SDS-PAGE方法确定细菌素的分子量范围。结果表明: 短乳杆菌KLDS1.0373所产细菌素的抑菌活性对热和pH不敏感, 在100 °C或121 °C处理30 min后抑菌活力略有增强, 可被多种蛋白酶失活, 但对α-淀粉酶不敏感。该细菌素分子量约为3.8 kD, 对多种革兰氏阳性和阴性菌有抑制作用, 作用方式为杀菌。

摘要:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对两种光合细菌的生物转化槲寄生培养液中菌体的蛋白质和几种同工酶进行研究, 并以纯光合细菌培养液中菌体作对照。结果表明, 光合细菌生物转化槲寄生过程中, 两种光合细菌的蛋白质、酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶均发生改变, 某些蛋白质、酯酶和过氧化物酶的合成受到抑制, 并有新的蛋白质、酯酶和过氧化物酶生成; 超氧化物歧化酶的表达未明显改变。由此可见, 槲寄生能诱导光合细菌合成新的酯酶和过氧化物酶, 这些诱导酶可能参与了槲寄生的生物转化。本研究为光合细菌生物转化槲寄生转化机理的研究及槲寄生在抗肿瘤领域的进一步应用奠定了基础。

摘要:对娄彻氏链霉菌ATCC10739固体发酵产生十八元大环内酯抗生素Borrelidin进行了发酵条件的优化。首先筛选得到了理想的发酵培养基; 其次考察了发酵时间、起始pH值以及在ISP-2培养基中添加附加碳源、氮源对Borrelidin产量的影响。初步确定最适发酵条件为: ISP-2培养基中添加1%甘油, 起始pH值为6.0, 培养温度30 °C, 发酵时间为7 d, 产量可达1.336 mg/L。采用有机溶剂萃取、硅胶层析和半制备型高效液相色谱(HPLC)等分离技术纯化得到Borrelidin。

摘要:为了实现外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达, 利用硫氧还蛋白作为分子伴侣构建双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将大肠杆菌硫氧还蛋白基因插入到pET22b载体Nde I和EcoR I位点之间, 同时在硫氧还蛋白编码基因的终止密码子前加入核糖体结合位点, 构建成双顺反子翻译偶联表达载体pDICT。将蚓激酶基因F238克隆到该载体, 转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE结果表明, 所表达的蚓激酶F238是可溶性蛋白。利用血纤维蛋白法对表达产物进行活性测定, 重组蚓激酶F238不仅具有纤溶酶活性, 而且具有激活纤溶酶原的激酶活性。该双顺反子翻译偶联表达载体的构建, 为在大肠杆菌中可溶性表达外源蛋白提供了新方法。

摘要:为了分析乳杆菌对致敏小鼠脾淋巴细胞分泌Th1/Th2细胞因子及抗体的体外影响, 用牛乳β-乳球蛋白腹腔注射BALB/c小鼠建立过敏症模型, 造模成功后, 分离致敏小鼠的脾淋巴细胞并与4种活/死乳杆菌(107 CFU/mL)体外共同孵育, ELISA法检测细胞上清液中细胞因子(IL-12、IFN-γ和IL-4)和抗体(总IgE、β-Lg特异性IgE和总IgG)含量。4种活/死乳杆菌均可体外调节致敏小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子和抗体的水平, 特别是热致死的发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌可提高淋巴细胞IL-12和IFN-γ的分泌, 抑制IL-4的分泌, 使其IFN-γ/IL-4比值(代表Th1/Th2细胞平衡)高于活菌, 与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。同时, 这两株热致死菌还可显著下调细胞上清液中总IgE、特异性IgE和总IgG抗体的浓度(P<0.05)。试验结果表明乳杆菌可提高牛乳β-乳球蛋白致敏小鼠脾淋巴细胞的IFN-γ/IL-4比值, 进而纠正Th2占优势的Th1/Th2失衡, 下调抗体分泌量, 且具有菌株特异性。

摘要:采用a凝集素作为载体蛋白, 首次将南极假丝酵母脂肪酶A展示在酿酒酵母细胞表面, 通过MD平板筛选获得表面展示型的CALA酵母工程菌株。免疫荧光检测显示CALA被成功展示在酵母细胞壁表面, 重组子经诱导后能在三丁酸甘油酯板上形成透明圈, 说明展示的CALA具有活性。重组酵母在液体培养基培养72 h, 活性达到最高, 为80.4 U/g干细胞。酿酒酵母展示的CALA最适温度及pH值为70 °C 和pH 8.0。经50 °C保温2 h, 仍含有60%水解酶活力。展示的CALA在pH 7.0和pH 8.0溶液中比较稳定。经DMSO处理2 h, 展示的CALA仍保持70%的活性。以上结果表明酵母展示的CALA可作为一种有潜质商业用途的全细胞催化剂。

摘要:副溶血弧菌是广泛存在于近海区域, 盐湖和海产品中的食源性致病菌, 会引起大规模的食物中毒。TLH (不耐热溶血毒素)和TDH (耐热直接溶血毒素)是副溶血弧菌最主要的毒力基因, 通过比较毒力基因的表达量可以间接比较同种菌株在不同应激条件下以及不同菌株之间的毒力差异。本文以在不同条件下培养的3株Vp为材料, 分别提取其总RNA, 以16S rRNA为内标基因, 运用荧光定量PCR技术检测副溶血弧菌TLH和TDH基因在不同应激条件下的表达差异。结果表明: 不同菌株和同种菌株在不同应激条件下tlh、tdh基因表达差异均显著; tlh的最适表达条件分别为5%盐度和20 °C; tdh的最适表达条件分别为1%盐度和25 °C。运用SPSS软件对实验结果进行统计学分析表明: 菌株对tlh表达的影响大于盐度大于温度; 菌株对tdh表达的影响大于温度大于盐度。

摘要:为了研究蜜环菌饮料对小鼠机体功能的影响, 采用环磷酰胺(CY)造模法制作小鼠免疫抑制模型, 通过灌胃不同剂量蜜环菌饮料, 研究对小鼠机体免疫功能的影响, 同时通过测定实验小鼠肠道中细菌总数、大肠杆菌数、乳酸菌和双歧杆菌数等, 分析不同剂量的蜜环菌饮料对肠道菌相的影响, 最后对小鼠进行了急性毒性试验研究, 以检测饮料有无毒副作用。结果表明蜜环菌饮料可明显提高小鼠脾脏和胸腺指数, 促进脾脏及胸腺的发育, 促进巨噬细胞的吞噬活性, 明显增强小鼠的免疫功能, 同时还能促进小鼠肠道有益菌的生长, 改善肠道微生物区系环境, 饮料没有对小鼠产生任何的毒副作用。证明蜜环菌饮料不仅增强机体免疫功能, 同时还增强肠道功能, 保持和促进机体健康。

摘要:来源于极端嗜热菌海栖热袍菌(Thermotoga maritima MSB8)的木聚糖酶B具有极高的热稳定性, 在饲料、造纸、能源和食品医药行业具有巨大应用潜力。携带酶基因xynB64的pET28a(+)重组载体在宿主大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达, 重组酶活力较低。更换宿主为携带稀有tRNA基因的大肠杆菌: BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL和Rosetta(DE3)后, 酶活力分别提高了197%和277%, 但是后者中的表达会形成部分包涵体。宿主菌为大肠杆菌Rosetta(DE3), 更换载体为4种融合表达载体pET32a(+)、pET42a(+)、pET43.1a(+)和pMAL-c2X进行表达, 重组酶分别融合了Trx、GST、Nus和MBP标签。其中Rosetta(DE3)/pMAL-c2X-xynB64表达酶活力最高, 相当于Rosetta(DE3)/pET28a-xynB64表达酶的88%, 而且目的酶表达量占全细胞蛋白的40%, 几乎不形成包涵体。

摘要:微生物燃料电池(MFC)是一种通过微生物的催化作用将有机物中的化学能直接转化为电能的生物反应装置, 研究表明内阻是限制微生物燃料电池产能的重要因素。本文对目前国内外有关微生物燃料电池内阻的研究成果进行了总结, 系统介绍了微生物燃料电池内阻定义、构成和常用的微生物燃料电池内阻测定方法, 重点分析了反应器、产电底物、产电微生物和操作条件等对微生物燃料电池内阻的影响, 并结合已有的研究结果提出了降低内阻、提高微生物燃料电池产电性能的可行性方法。

摘要:PBL教学是以问题为载体, 以学生为主体, 突出能力培养目标的一种全新的教学模式。实践证明高职院校的食品微生物课堂融入PBL教学后, 能充分发挥学生的主体性地位和教师的主导性作用, 可大大提高学生的学习兴趣, 培养学生自主学习和合作学习的能力, 提高学生文献检索、分析总结等各项综合素质, 取得了良好的教学效果。

摘要:从研究生“高级微生物学”课程的定位、研究生学习该课程的目的、知识背景差异及教学过程中的问题等方面分析了目前研究生“高级微生物学”教学中存在的问题。通过教学内容的优化、教材建设、教学方法改革、师资队伍建设以及建立师生交流平台等方面进行教学改革实践, 取得了较好的教学效果。

摘要:“生化工程”是高等院校生物工程专业的一门重要的专业课。为了与国际生物技术的快速发展接轨, 目前我国高校“生化工程”普遍采用双语教学模式。主要从教学方式、教学内容、实验环节及考试方式等方面分析了生化工程双语教学中存在的问题, 提出了一系列改革措施, 为取得良好教学效果进行了探讨。

摘要:针对普通高校在进行双语教学中遇到的困难, 为提高“食品微生物学”双语教学效果, 从允许学生选择双语教学、充分利用教材设计、多种措施减轻学生学习压力等5个方面, 讨论了所采取的措施以及取得的教学效果。

摘要:为了快速从土壤中定向筛选抗生素产生菌, 本研究利用宏基因组技术进行了土壤中抗生素产生菌快速筛选方法的探索。对6 种不同土质的土壤利用液氮冷冻法提取土壤基因组DNA 并用PVPP柱层析法进行纯化, 每克湿土可得到32.25?61.25 μg DNA, 片段大小为23 kb左右, 说明宏基因组DNA样品完整, 16S rDNA的 PCR结果证明了该基因组DNA纯度可用于后期的分子操作。利用Herbimycin产生菌掺入法进行了抗生素产生菌筛选方法学的验证。结果证明, 每克湿土掺入103个Herbimycin产生菌时, 利用Herbimycin合成基因簇的特定引物即可从所提取的土壤基因组DNA中扩增出目标条带, 并且可以利用传统菌种分离方法从土壤中重新分离出来被掺入到土壤的Herbimycin产生菌。这些结果证明本研究建立的定向抗生素产生菌筛选方法, 具有快捷、灵敏的特点, 大大减少传统筛选方法的工作强度和时间, 为微生物新药的研发建立一种全新的研究方法。