摘要:

摘要:分析沙眼衣原体CT058蛋白在感染细胞中的定位。克隆表达CT058蛋白; 纯化的CT058融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体; 间接免疫荧光法对CT058蛋白在沙眼衣原体感染细胞中的定位进行分析; Western blot检测CT058蛋白在原体和网状体中的表达情况。间接免疫荧光染色实验显示CT058蛋白位于包涵体内; 鼠抗GST-CT058抗体与GST-CT058融合蛋白吸附后特异性染色消失, 而与GST-CT232融合蛋白吸附后仍然可见GST-CT058抗体的包涵体染色特征; Western blot证实CT058蛋白在纯化的原体和网状体上均有表达。CT058蛋白定位于沙眼衣原体感染细胞的包涵体内。

摘要:

摘要:克隆嗜热枯草芽孢杆菌WY-34普鲁兰酶基因并在大肠杆菌中进行表达, 对重组酶进行纯化和酶学性质研究, 根据枯草芽孢杆菌的普鲁兰酶蛋白序列, 设计PCR引物对WY-34的普鲁兰酶基因进行克隆及异源表达。对表达蛋白的最适pH、pH稳定性及最适温度、温度稳定性等特性进行研究, 并测定重组普鲁兰酶的底物特异性。将普鲁兰酶基因pluA克隆及分析序列后, 发现基因长度为2.2 kb, 编码718个氨基酸, 在大肠杆菌中异源表达。通过Ni-IDA亲和层析一步纯化得到比活力为93.2 U/mg的纯酶, SDS-PAGE和凝胶层析测定的分子量分别为76.2 kD和74.3 kD。酶学性质研究表明, 该酶的最适温度为40 °C, 在温度不高于45 °C条件下稳定; 最适pH为6.0, 同一温度下pH 6.0?9.0范围内处理30 min可以保持80%以上的酶活力, 此酶对普鲁兰糖有很强的底物特异性。此重组普鲁兰酶的酶学性质表明此酶具有一定的工业化应用价值。

摘要:获得低温淀粉酶高产菌株, 确定该菌株所产淀粉酶的酶学性质。从大黑山(大连)污泥中筛选菌株, 通过菌株的形态特征、生理生化和16S rDNA序列鉴定确定其种属, 对其酶学性质进行初步研究。获得1株低温淀粉酶高产菌株C2, 经鉴定其为微小杆菌属, C2所产低温淀粉酶最适反应温度为25 °C, 酶的热稳定性比较差, 最适pH为7.5, Ca2+和Fe2+对该酶有激活作用, Cu2+、Ni2+、Go2+等抑制酶活性。经薄层层析(TLC)鉴定酶解产物为葡萄糖, 说明该菌株具有产生低温淀粉糖化酶的能力。菌株C2所产淀粉酶符合低温淀粉酶性质, 值得进一步研究。

摘要:为了更好地了解石油污染盐碱土壤翅碱蓬根围的细菌多样性, 采用16S rRNA基因克隆文库方法对其进行分析, 在此基础上采用富集培养方法从该生境中分离筛选耐盐石油烃降解菌。16S rRNA基因克隆文库分析结果表明, 海杆菌属(Marinobacter)、食烷菌属(Alcanivorax)和假单胞菌属(Pseudomonas)是该生境中的优势菌。他们可能在石油污染盐碱土壤翅碱蓬植物修复过程中起重要作用。进一步采用富集培养方法, 从该生境中分离得到8株耐盐石油烃降解菌, 可以耐受6%?10%浓度的NaCl, 石油烃降解率在32.3%?57.0%之间。经16S rRNA基因序列分析, 8株菌隶属于戈登氏菌属(Gordonia)、无色杆菌属(Achromobacter)、迪茨菌属(Dietzia)、芽胞杆菌属(Bacillus)和假单胞菌属(Pseudomonas)。他们可能参与石油污染盐碱土壤翅碱蓬植物修复过程中的石油烃降解。

摘要:为了简化解脂耶氏酵母表达载体构建过程、消除抗生素污染, 将mel基因(编码酪氨酸酶)作为新型报告基因用于构建新型酵母表达载体, 利用组装PCR人工合成基因mel, 并用重叠PCR将其与同源组成型强启动子pTEF、分泌性信号肽XPR2pre及强终止区LIP2t融合, 构建新型胞外及胞内表达载体, 并利用其在解脂耶氏酵母野生菌株中表达人源癌基因rho。成功获得mel全基因并将其与启动子、信号肽和终止区融合, 得到融合片段TXML, 用其替换原有表达载体的筛选标记基因ura3d4, 构建得到新型胞外及胞内表达载体pINA1297-M和pINA1297-a-M, 转化后的酵母阳性转化子性状明显, 随后利用此新型表达系统获得可溶性异源蛋白Rho。首次实现了将mel作为一种便捷、价廉、无污染的新型筛选标记基因运用于非常规酵母表达系统中, 更为mel在其它真核表达系统中的运用奠定了技术基础; 获得的可溶性Rho蛋白可为研究其性质、结构、功能及与Rho癌基因家族其它成员的相互作用提供条件。

摘要:体外克隆化脓性链球菌5005的ftsb基因, 表达并纯化FtsB蛋白, 并对其铁色素结合特性进行初步研究。首先通过PCR方法从基因组中扩增ftsb基因, 将其连接到pGEX4T-1载体上, 转入大肠杆菌DH5α中大量扩增, 将测序正确的重组载体转化到表达宿主大肠杆菌BL21进行表达,优化诱导表达条件。利用亲和层析方法纯化表达产物, 并对FtsB的铁色素结合特性进行研究, 同时通过DEPC封闭组氨酸实验对其结合位点进行初步研究。成功构建原核表达载体pGEX-ftsb, 获得分子量约33 kD的野生型FtsB蛋白, 产率为30 mg/L。紫外-可见光谱研究表明FtsB和铁色素结合后在450 nm处出现紫外吸收峰, DEPC封闭组氨酸实验证明FtsB中组氨酸不参与铁色素的结合。对FtsB蛋白进行铁色素结合特性和结合位点进行研究, 为进一步研究细菌中的铁色素转运机理及开发疫苗候选物和药靶奠定一定的理论基础。

摘要:玉米赤霉烯酮具有较强的生物毒性, 检测谷物中的玉米赤霉烯酮在食品和饲料安全中具有重要的作用。将玉米赤霉烯酮与牛血清白蛋白的偶联物免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体, 并建立基于单克隆抗体的酶联免疫法作为检测玉米赤霉烯酮的方法。结果共筛选到4株抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体, 3株抗体亚类为IgG1, 1株为IgG2b。选择其中的一株杂交瘤细胞2C9制备小鼠腹水, 纯化后测定了抗体效价为1/40 000。以此单抗建立的间接竞争ELISA方法, 其半数抑制率(IC50)为1.90 ng/mL, 检测限(IC10)为0.051 ng/mL, 检测区间(IC20?IC80)为0.115?13.900 ng/mL; 且对玉米赤霉烯酮有很好的特异性。回收率检测在样品含1.46?93.80 μg/kg时回收率为96.5%?113.0%。本实验建立的检测方法可用于多种谷物及饲料样本中玉米赤霉烯酮的检测。

摘要:为了研究植物乳杆菌IMAU10014对番茄的促生长作用和对番茄灰霉病的生防效果以及对植株叶片几种防御酶活性的影响, 通过植物乳杆菌IMAU10014发酵液对番茄种子浸种的方法检测促生长作用以及对番茄苗的叶片喷雾和灌根的方法来测定其作为生防杀菌剂的意义。在菌液浓度为107 CFU/mL, 对番茄浸种6?8 h, 明显提高了种子发芽率及芽长, 发芽率达到100%; 另外在番茄幼苗接种病原菌后, 再由植物乳杆菌IMAU10014做不同处理, 病情指数可由47.22分别降至32.41和26.39 (防治效果分别达31.36%和44.11%); 与植物防御抗病相关的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)及多酚氧化酶(PPO)活力都有明显增加。植物乳杆菌IMAU10014作为生物农药防治灰霉病有很大的潜力。

摘要:为了鉴定凡纳滨对虾的优势腐败菌并研究其是否存在以N?酰基高丝氨酸内酯类化合物(AHLs)介导的群体感应系统, 采用16S rRNA序列鉴定凡纳滨对虾的优势腐败菌, 并采用紫色杆菌CV026对优势腐败菌的AHLs活性进行检测。结果发现凡纳滨对虾优势腐败菌菌株1 (Aci-1)和菌株2 (Aci-2)均为不动杆菌属, 均存在以AHLs为信号分子的群体感应系统。添加外源信号分子AHLs能促进Aci?1菌株生物膜的形成, 且呈浓度依赖性。在一定的贮藏范围内, 凡纳滨对虾腐败菌信号分子AHLs浓度与细菌总数、挥发性盐基氮含量存在正相关性, 其相关系数r分别为0.846 6和0.986 7, 分别在P<0.05与P<0.01水平上显著。结论是凡纳滨对虾优势腐败菌不动杆菌菌株存在以AHLs介导的群体感应系统, 且与凡纳滨对虾的腐败密切相关。

摘要:发掘维罗纳气单胞菌特异性更强的检测靶点和毒力相关基因靶点, 建立能够检测致病性维罗纳气单胞菌的PCR检测方法。通过序列比对分析气单胞菌的16S rRNA基因序列, 筛选对维罗纳气单胞菌特异的引物, 用于检测种特异性, 利用气单胞菌气溶素基因保守引物, 检测菌株的致病性, 并进行反应条件和反应体系的优化, 灵敏度试验和特异性试验。发掘并设计的维罗纳气单胞菌16S rRNA特异性引物结合气单胞菌气溶素基因保守引物建立的检测方法, 对12株气单胞菌和10株非气单胞菌的检测结果显示, 所有致病性维罗纳气单胞菌都能扩增到大小分别为343 bp和232 bp的特异性条带, 而非维罗纳气单胞菌的致病性气单胞菌只能扩增到232 bp的气溶素基因特异性条带, 其它菌株都不能扩增到目的条带。灵敏度试验表明, 该反应体系的检测灵敏度为1.35×10?3 mg/L。我们建立的致病性维罗纳气单胞菌检测方法能特异地检测致病性维罗纳气单胞菌, 并具有高度灵敏性。

摘要:为快速高效筛选L-精氨酸高产突变株, 建立一种缺陷菌株平板显色法并采用低能N+离子束对L-精氨酸生产用菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5进行诱变处理, 通过上述平板显色法筛选获得高产突变株。对突变株进行摇瓶发酵实验, 最终选育出一株L-精氨酸产量较高且产酸性能比较稳定的突变菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5-36。该菌株摇瓶发酵L-精氨酸产量可达35.85 g/L, 比出发菌株提高了19.5%。因此, 缺陷型菌株平板显色法可以用于快速、高效筛选高产L-精氨酸突变株。

摘要:水稻黄单胞菌(X. oryzae)三型分泌系统(Type Ⅲ secretion system, T3SS)效应物(Effector)一直被认为是水稻黄单胞菌最重要的致病因子之一。水稻黄单胞菌水稻致病变种(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)和水稻黄单胞菌栖稻致病变种(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola)分别引起水稻两大细菌病害水稻白叶枯病(Bacterial leaf blight)和水稻细菌性条斑病(Bacterial leaf streak)。基因组分析揭示, 水稻黄单胞菌中至少存在28个家族的T3SS效应物, 分为TAL (Transcription activator-like effectors)效应物和non-TAL效应物(Non transcription activator-like effectors)两大类。通过对水稻黄单胞菌中T3SS效应物的数量、种类、结构、宿主靶标等方面进行综述, 为全面了解水稻-水稻黄单胞菌互作的分子机理, 调控网络以及水稻分子育种提供一种新洞察力。

摘要:建构主义学习理论在高等院校人才培养模式改革中日益受到关注。运用建构主义学习理论观点, 在微生物实验课程教学中构建基础实验和自主实验专题相结合的实验教学内容新体系, 运用多媒体和网络技术创造良好的学习情境和高效的师生沟通平台, 建立更为全面、客观和合理的多重实验考核体系。这有利于激发学生对微生物学实验的兴趣, 调动学生的主观能动性, 提高微生物学实验教学的实际效率和教学质量。

摘要:肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种重要的致病菌, 加深其致病机理的基础研究将为相关疫苗研究及疾病控制等提供新的思路和依据。串联亲和纯化(TAP)技术是最近发展的分离纯化天然状态蛋白质复合物进而研究蛋白质相互作用的新方法。用我们自己构建的原核表达串联亲和标签载体, 在大肠杆菌O157:H7中表达了标签融合蛋白GroEL-TAP, 建立了非变性条件下制备蛋白复合物的方法, 并且对串联亲和纯化过程中的相关实验条件进行了探索和优化, 最终得到了高纯度的GroEL-TAP与天然GroEL形成的嵌合型多聚体复合物。这表明我们建立的串联亲和纯化技术能高度特异地纯化靶蛋白参与形成的复合物, 为后续寻找O157:H7中毒力蛋白参与形成的复合物奠定了实验基础。

摘要:建立一种快速、敏感、特异的检测H6亚型禽流感病毒(AIV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据H6亚型AIV血凝素(HA)基因序列的保守区8个位点设计了6条特异性LAMP引物, 以H6亚型AIV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增, 对反应条件和反应体系进行优化。结果表明该方法的特异性良好, 对其他呼吸道病原体均无扩增反应。该方法灵敏度高, 最低可检测到H6亚型AIV RNA为0.01 pg, 该方法无需特殊仪器, 只需在水浴锅中进行, 是一种适于基层的简便、灵敏、快速的H6亚型AIV检测方法。