摘要:

摘要:为探讨鼠伤寒沙门菌与巨噬细胞共作用时细胞自噬对凋亡的影响, 用加入自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin, RAPA)和未加RAPA的RPMI 1640过夜培养小鼠腹腔巨噬细胞J774A.1, 以携带一分子量为100 kb毒力质粒的鼠伤寒沙门菌标准毒株SR-11为受试菌。首先测定RAPA对菌量及细胞活性的影响, 然后建立细胞感染模型, 在细菌与细胞共作用后动态观察24 h, 不同时间点检测细胞超微结构变化、自噬泡的形成、Beclin-1和Bcl-2的表达、细胞存活率和胞内活菌计数以及细胞凋亡情况。结果显示, RAPA单独作用于细菌或细胞时菌量及细胞活性均无变化; 而对细胞感染模型而言, RAPA作用与否细胞内的细菌数及细胞存活率均有显著改变, RAPA可明显降低细胞内活菌数及其所致的巨噬细胞凋亡率(P < 0.05); RAPA干预组在细菌与细胞共作用早期, 部分细菌可被双层膜包裹形成自噬泡, 细胞超微结构正常; Beclin-1的表达量增加, 而Bcl-2的表达量降低; 后期细胞破坏程度明显轻于未用RAPA组。以上结果提示, 通过调控细胞自噬水平以减轻宿主细胞凋亡, 可作为防治某些感染性疾病的新途径。

摘要:

摘要:对一菌两酶工程菌HC01转化底物DL-对羟基苯海因(DL-HPH)的最适条件及其细胞固定化进行了研究, HC01游离细胞转化DL-HPH的最适条件为40°C, pH 7.5。通过对固定化细胞酶活力测定, 确定细胞固定化的最优条件为海藻酸钠浓度2.5%, 细胞浓度为0.029 g/mL, 钙离子浓度为3%。固定化HC01的热稳定性比游离细胞高5°C, 二价金属离子Mn2+、Mg2+、Cu2+、Co2+和Ni2+在浓度为0.1 mmol/L时对固定化细胞中D-海因酶(HYD)和N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶(CAB)两酶的活力无显著影响, Mn2+和Mg2+可分别使游离细胞中CAB活力提高至原来的2.1和2.7倍。在氮气保护下, 当初始pH为9.0、转化温度为40°C、转速为80 r/min、利用固定化HC01转化30 g/L的DL-HPH时, 36 h后转化率可达97%左右, 产物D-HPG经纯化后光学纯度达到99.7%, 得率可达85%。

摘要:从若尔盖高寒湿地距表层80 cm处土壤中筛选出一株纤维素酶高产菌株XW-1。根据形态学、生理生化特征以及16S rDNA核酸序列分析结果表明, 该菌属于缺陷短波单胞菌(Brevundimonas sp.)。对该菌产酶条件研究表明, XW-1在含0.5% CMC-Na条件下, 20°C培养3 d后出现最高酶活, 达到15.6 U/mL。对其酶学性质初步研究表明, 该菌株所产纤维素酶的最适pH为6.0, 最适反应温度为20°C, 15°C时相对酶活达到80%, 并且在5°C时, 相对酶活仍能保持56%。

摘要:采用纯培养技术对一个降解喹啉的反硝化反应器筛选到的26株优势菌株进行反硝化能力以及好氧降解喹啉能力研究, 其中的反硝化菌还测定了反硝化条件下的喹啉降解能力。结果发现Bacillus、Staphylococcus、Pseudomonas、Brucella、Delftia等5个属的10株菌具有反硝化能力, Rhodococcus属的9株细菌能够好氧降解喹啉, 揭示了反硝化喹啉降解反应器中主要细菌类型的代谢特性, 发现在缺氧反硝化反应器中存在多样的代谢类型的细菌。

摘要:膜蛋白在细胞分化、信号转导等生理活动中发挥着重要作用, 然而膜蛋白结构与功能的研究却受到高质量蛋白制备的严重制约。将斑马鱼趋化因子受体CXCR4b基因克隆到pMAL-p4x表达载体中, 在大肠杆菌TB1中表达麦芽糖结合蛋白(MBP)-CXCR4b融合蛋白。通过系统优化其发酵表达条件, 实现了CXCR4b的过量表达。最佳表达条件为: 宿主菌选用大肠杆菌TB1, TB培养基, 诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L, 诱导时机为对数中后期。通过对10种不同表面活性剂的筛选, 发现DM、FC-14和Brij35等表面活性剂对CXCR4b有较好的增溶效果。利用Ni2+亲和色谱和S200凝胶色谱两步纯化, 得到CXCR4b的纯度可达90%以上。圆二色谱检测显示纯化的CXCR4b呈典型的α螺旋结构。

摘要:构建携带N-酰基高丝氨酸内酯酶基因(aiiA)的重组毕赤酵母表达载体pPIC3.5K-aiiA, 采用电转化方法转入毕赤酵母GS115, 经营养缺陷型培养基、表型鉴定和高G418浓度筛选获得高拷贝表达盒的酵母转化子, 用0.5%甲醇诱导表达, RT-PCR鉴定可检测到重组酵母中编码目的基因成熟肽的mRNA, SDS-PAGE和Western blot检测结果表明, aiiA基因在毕赤酵母中成功表达, 用指示菌紫色杆菌CV026检测发现目的蛋白具有降解N-酰基高丝氨酸内酯的活性。

摘要:粪产碱杆菌合成热凝胶需要消耗大量ATP用于前体物质UDPG的再生, 利用3种具有不同高能磷酸键的低聚磷酸盐Na4P2O7 (2P)、Na5P3O10 (3P)和(NaPO3)6 (6P)作为高能磷酸键供体, 并取代培养基中的KH2PO4-K2HPO4 (1P)而作为磷元素供体, 研究其对粪产碱杆菌合成热凝胶的影响。结果表明相对于对照磷元素摩尔含量的单倍和双倍量添加3P和6P能够分别提高热凝胶产量23%和134%, 达到15.1 g/L和30.0 g/L; 同时副产物乙酸分别较对照降低了87.5%和77.7%; 在以双倍量添加6P后, 副产物甲酸的生成也显著降低75.7%。当培养基中不含碳酸钙进行低聚磷酸盐添加实验时, 生物量显著降低, 热凝胶合成几乎没有, 发酵液pH最低降到2.1。以磷元素单倍量和双倍量分别添加3P和6P, 并与1P混合发酵时, 热凝胶产量变化不大; 但是, 当发酵液不存在碳酸钙而1P被作为缓冲物质时, 以单倍量和双倍量添加6P使得热凝胶产量较对照分别提高60.4%和49.4%, 分别达到18.4 g/L和16.9 g/L。

摘要:从富含纤维素环境筛选获得一株纤维素降解菌株FU05, 通过形态学特征及ITS序列分析确定其为长梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)。PCR扩增获得该菌株的bgl2、cbh2和eg1。序列分析表明, 这3种纤维素酶基因与GenBank上其他木霉同种纤维素酶基因具有较高同源性: bgl2基因与里氏木霉bgl2基因(AB003110)同源性达91%; cbh2基因与康宁木霉cbh2基因 (DQ504304)同源性达99%; eg1基因与长梗木霉eg1基因(X60652)同源性达95%。3种纤维素酶基因编码的相应氨基酸序列与其他木霉纤维素酶的氨基酸序列相似性也非常高。对上述纤维素酶基因编码的相应蛋白进行PROSITE motif search, 对其N端糖基化位点、纤维素结合区、糖基水解酶家族特征结构区等进行了定位。

摘要:为揭示类芦(Neyraudia reynaudiana)等水土保持植物的耐低磷机制, 开发溶磷菌种质资源, 提高赤红壤磷素利用率, 从类芦根际土壤中筛选到一株溶磷能力较强的真菌FP1, 经形态学和ITS序列分析, 鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger)。3种难溶性磷酸盐液体培养基接种菌株FP1后, 其pH值和溶磷量的动态变化显示, 培养液的pH值均呈显著下降趋势。溶磷量与培养时间有关, 除磷酸三钙外, 菌株FP1对其他难溶性磷酸盐的溶磷趋势均为先上升再下降并趋于稳定。菌株FP1对不同磷源的最大溶磷率顺序为: 磷酸铝(92.02%) > 磷酸三钙(41.62%) > 3种磷酸盐的混合物(35.86%) > 磷酸铁(19.20%)。FP1对磷酸铝和磷酸铁都具有较强的溶磷能力, 表明抗逆性强的水土保持植物类芦根际土壤蕴藏着高效的溶磷微生物资源。

摘要:从长期受农药污染的农田土壤中分离筛选到一株降解氰戊菊酯杀虫剂的细菌菌株FDB。经形态和生理生化特征鉴定以及对16S rDNA序列进行同源性比较, 将该菌株鉴定为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa。FDB能以氰戊菊酯杀虫剂为唯一碳源生长, 在30°C培养5 d对100 mg/L氰戊菊酯异构体的降解率分别达到69.06% (SR + RS)和64.32% (SS + RR)。FDB的最适生长条件为: 温度35°C, 初始pH值7.0, 250 mL摇瓶装液量75 mL。采用超声波方法破碎菌体细胞, 得到粗酶液。胞内和胞外粗酶液对氰戊菊酯异构体的降解试验表明, FDB的氰戊菊酯降解酶属于胞内蛋白组分。

摘要:通过传统培养和PCR-DGGE技术, 分析了新疆南疆不同连作年限的棉田土壤微生物的变化情况, 结果表明: 随着连作年限的增加, 土壤中细菌、真菌的数量、比例、多样性指数的变化表现为先增加后下降, 至连作15年时达到较低值, 之后随着连作年限的继续增加又表现为回升的趋势。细菌的种类数、优势种在不同连作年限的样品中的变化不明显, 多样性指数变化幅度较小, 群落结构变化不大; 真菌的种类数、优势种在不同连作年限的土样中的变化较大, 群落结构变化较大, 随着连作时间的增加, 优势种的种类趋于单一化, 真菌的群落结构受到连作年限的影响更明显。

摘要:于西瓜大棚内分别对连作2、4、8年的土壤铺设玉米秸秆生物反应堆, 同时设立各自相应的对照, 定期测定各处理土壤养分含量、pH值、土壤微生物数量和土壤酶活性等, 以评价秸秆生物反应堆修复连作土壤、改善土壤健康状况的效应。结果表明, 使用秸秆生物反应堆1年或2年之后, 连作土壤有机质含量、土壤微生物数量、土壤多酚氧化酶、蔗糖酶活性等显著提高。连作8年的土壤连续2年使用秸秆生物反应堆后, 土壤有机质含量达到了2.41%; 土壤细菌数量为1.65 × 108 CFU/g、放线菌为3.12 × 106 CFU/g、真菌为0.5 × 105 CFU/g, 土壤中丛枝菌根(AM)真菌孢子密度达到57个/50 mL, 分别是对照的2.2、5、1.44、1.36和3.2倍; 多酚氧化酶和蔗糖酶活性则分别是对照的1.25和2.13倍。表明秸秆生物反应堆处理对修复连作土壤、改善土壤健康具有一定作用。

摘要:副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)是一种在海产品中广泛存在的嗜盐性细菌, 也是重要的食源性致病菌。传统检验方法检测周期长、特异性低, 为提高检测效率、缩短检测周期, 开发出一种副溶血性弧菌显色培养基(HKMVPM), 与国外同类产品KHVPM和TCBS在灵敏度、特异性及检测效果方面进行了比较和初步评价。结果显示, HKMVPM显色培养基和KHVPM显色培养基均具有较好的选择性和特异性, 这3种培养基对天然污染样品的分离率高低顺序为HKMVPM > KHVPM > TCBS。显色培养基具有高检出率及高特异性的特点, 有良好的应用前景。

摘要:分两个实验考察了饲料中添加自制酵母甘露寡糖、外购甘露寡糖和黄霉素对奥尼罗非鱼幼鱼[(l.00 ± 0.04) g]肠道菌群的影响。传统菌落计数结果表明, 不同的添加剂都能明显地改变幼鱼肠道中的乳酸杆菌和大肠杆菌的数量及比例, 其中0.5%自制酵母甘露寡糖使乳酸杆菌的数量增加10.77% (P < 0.05), 大肠杆菌的数量减少14.80% (P < 0.05), 使乳酸杆菌与大肠杆菌的比例提高到0.9720。DGGE图谱分析表明, 自制酵母甘露寡糖、外购甘露寡糖、黄霉素的加入都改变了罗非鱼幼鱼原有的肠道微生物的微生态环境, 其中自制酵母甘露寡糖对罗非鱼幼鱼肠道微生物的微生态影响最大。

摘要:利用λ-Red重组系统对福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因进行缺失突变, 构建了福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因缺失突变株ΔipaH4.5, 利用低拷贝质粒构建ipaH4.5缺失突变株的回复突变株ΔipaH4.5HF。PCR 方法证实了ipaH4.5基因的缺失和回复。对野生株、突变株和回复突变株的生长代谢及细胞侵袭能力进行比较; ELISA方法检测3株菌侵袭鼠J774巨噬细胞后培养上清中炎性因子的水平。生长代谢实验表明缺失和回复ipaH4.5不影响志贺氏菌的生长速度, 侵袭实验表明缺失和回复ipaH4.5也不影响志贺氏菌对HeLa细胞和鼠J774巨噬细胞的侵袭能力, 表明ipaH4.5基因与志贺氏菌的生长代谢和侵袭能力无关; 鼠J774巨噬细胞培养上清中细胞因子水平的改变提示该基因在志贺氏菌侵入细胞后抑制宿主细胞炎症反应。

摘要:对葡萄灰霉病菌的生防枯草芽孢杆菌BS2菌液成分及胞外蛋白的抑菌机制进行了初步研究, BS2对葡萄灰霉病菌具有较好的拮抗作用, 其菌液成分和胞外蛋白经20°C-120°C处理后, 抑菌效果存在差异。BS2的菌液成分及胞外蛋白对灰霉病菌的产孢、萌发和菌丝的生长等方面均具有较好的抑制作用, 且对灰霉病菌菌丝的原生质有囊泡和颗粒化现象。由此分析, BS2抑菌活性物质是多种成分共同作用的结果, 抑菌物质中含有对温度敏感的高分子蛋白质, 且抑菌机制也是从多方面共同起作用。

摘要:考察了在大肠杆菌中自诱导表达人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白的可行性, 并对自诱导培养条件及培养基成分进行优化, 以提高蛋白产量。实验结果表明, 最优培养基成分为蛋白胨19.17 g/L, 酵母膏9.59 g/L, Na2HPO4 5.72 g/L, KH2PO4 5.48 g/L, (NH4)2SO4 2.66 g/L, NaCl 3.33 g/L, 甘油2% (v/v), 葡萄糖0.68 g/L, 乳糖6.33 g/L, MgSO4 0.24 g/L。在温度33°C、接种量1%、pH 7、装瓶量20 mL/100 mL培养条件下, 用该最优培养基自诱导表达人胰高血糖素样肽-1突变体融合蛋白的产量可达348.6 mg/L。

摘要:纤维素(植物细胞壁的主要成分)是自然界最丰富的一种可再生资源, 但是极难降解利用。纤维素体是一种多酶复合体, 能够高效降解纤维素, 降解产物能够被某些厌氧微生物利用发酵产乙醇。综述了近年来产纤维素体菌厌氧降解纤维素制乙醇的研究进展, 报道了纤维素体结构和功能、重组设计型纤维素体、代谢工程、混菌培养等研究方向的最新成果和思路, 并对其前景作了展望。可以预期, 随着研究的深入, 生物质制乙醇必将日益显示出其强大的市场竞争力。

摘要:植酸酶是一类催化植酸水解逐步释放磷酸基团形成低级肌醇磷酸衍生物的正磷酸单酯磷酸水解酶。植酸酶在动物营养、资源环境保护和人类健康等领域有巨大的应用潜力。目前, 人们对植酸酶的多样性及其分类的认识比较模糊甚至错误, 严重影响了植酸酶的研究进程和水平。首先简要概述了基于最适pH和立体专一性的植酸酶分类, 然后着重论述了基于结构和催化机理的植酸酶分类及其代表酶特征的最新研究进展, 最后探讨了根据不同分类标准特别是基于结构和催化机理准确理解和全面表征各种植酸酶的重要性, 以期为植酸酶的研究和应用提供参考。

摘要:结合高等农林院校“兽医微生物学”专业教学特点及双语教学的现状, 分析了影响双语教学效果的因素。在此基础上, 提出了相应完善“兽医微生物学”双语教学的建议和措施。在教师配备、教材编写、教学手段等方面做了大量改进, 以切实提高“兽医微生物学”双语教学质量。

摘要:在发酵动力学课程教学中, 针对菌体生长速率与菌体比生长速率、菌体实际生长得率系数(Yx/s)与理论生长得率系数(Ygs)、产物实际得率系数(Yp/s)与理论得率系数(Yps)、补料分批发酵中比生长速率调控等常见知识难点进行了释疑解难尝试, 收到了较好的课堂教学效果。

摘要:精品课程是具有一流教师队伍、一流教学内容、一流教学方法、一流教材、一流教学管理等特点的示范课程。精品课程建设的关键是一流教师队伍的培养。何谓“一流教师”? 一流的教师应具有宽宏的气度、高深的学术造诣、精湛的教学艺术、较高的人文素养和良好的心理素质。

摘要:以SYTO-9和PI两种荧光染料对细菌进行核染, 以市售的黑色钢笔墨水替代伊拉克黑, 利用手动压片方式对标本进行固定, 自建一种“活的非可培养状态”(VBNC)细菌荧光显微镜观察技术。通过总结分析该项技术方法在应用过程中所出现的问题, 如存在背景荧光、菌体聚集、荧光图像模糊、滤膜吸附能力差、菌体形态不鲜明、菌体荧光减淡等, 并提出相应的解决策略, 旨在给予相关研究者以帮助和启迪。

摘要:从中国广东、海南罗非鱼主养区发生爆发性疾病的多个养殖场的罗非鱼病鱼体上, 分离到多株致病菌株。人工感染试验显示分离菌株具有较强的致病力, 有多株经腹部注射分离细菌浓度为 1 × 106 CFU/mL时可使100%的受感染鱼死亡, 选择其中7株强毒株进行药物敏感性实验与鉴定。不同菌株对药物敏感性存在一定的差异但与菌株来源无相关性, 29种抗生素中对13种敏感、7种不敏感、9种存在菌株的差异。各分离菌株均为革兰氏阳性菌, 呈β溶血。采用链球菌快速鉴定系统ID 32 STREP、Lancefield分析及多项补充生理生化鉴定结果, 初步判断为无乳链球菌Streptococcus agalactiae。PCR扩增16S rRNA基因和GBS-specific gene cfb (CAMP factor)基因的全长序列, BLAST分析显示所有菌株的16S rRNA基因与GenBank上登录的无乳链球菌的相应序列高度同源 (> 99.8%), 各分离菌株间的16S rRNA基因序列也高度同源 (≥99.9%-100%)。各菌株cfb基因序列高度同源 (100%), BLAST显示与已知无乳链球菌的相应序列也具有高度同源性 (≥99.0%)。综合上述实验结果, 可判定广东与海南罗非鱼主养区2009年夏季发生的罗非鱼爆发性疾病的病原菌为无乳链球菌。