摘要:

摘要:采用平板筛选法, 从红树林放线菌中筛选到一株有较强木聚糖酶活的菌株zxy19, 其16S rDNA序列与Streptomyces sampsonii 的同源性仅为96%。该菌株木聚糖酶活为852.41 IU/mL, 酶反应最适pH 值为7, 最适反应温度为60°C。用针对木聚糖酶基因保守结构域的一对简并引物扩增到该酶基因部分序列,进而通过反向PCR扩增到了完整的酶基因。对该基因序列分析结果表明此木聚糖酶基因属于糖基水解酶家族11的成员, 酶蛋白氨基酸序列与已报道序列同源性最高为79%(Streptomyces lividans xylanase B)。构建了该酶重组表达质粒pET-28a-xyl696, 经过IPTG诱导实现了该酶蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的异源表达, 且通过镍柱纯化后的表达产物具有生物学活性。

摘要:从泰山土壤宏基因组文库中发现可能的b-半乳糖苷酶基因pwtsA, 将其克隆到表达载体pET30a, 转化E. coli BL21(DE3)。工程菌在IPTG诱导下高效表达可溶性的重组蛋白PWTSA, 分子量为57 kD, 与预期大小一致。PWTSA能够水解ONPG产生o-硝基酚, 酶活力为13.6 U/mg, 确证了重组蛋白为b-半乳糖苷酶。PWTSA的最适反应温度在85°C ~95°C之间, 最适pH值为6.5, 对90°C左右的高温有很好的耐受力。在标准反应条件下, 酶作用于底物ONPG的米氏常数Km为0.83 mmol/L。

摘要:以四川自贡大公古盐井盐卤为研究对象, 分离获得112株中度嗜盐菌。经形态特征、生理生化特征和16S rRNA同源序列分析表明：112菌株分属于细菌域的Planococcus、Halomonas、Halobacillus、Oceanobacillus和Virgibacillus属, 与P. rifitiensis和H. venusta、H. trueperi、H. blutaparonensis、V. picturae在16S rRNA基因水平分别有100%和99%的高相似性。但菌株QW06、QW12、QW15和QW18分别与O. profundus、H. trueperi和H. blutaparonensis在菌落形态、革兰氏染色、产酸、明胶水解和淀粉水解等表型特征上有明显的差异。同时, 16S-23S rRNA ISR-PCR基因指纹图谱也表明QW06、QW12、QW15和QW18不同于参考菌株O. profundus KCCM 42318和H. trueperi DSM 1040T、H. blutaparonensis ATCC BAA 1217T, 说明QW06、QW12、QW15和QW18分类地位有待进一步确定。实验结果不仅揭示了大公古盐井中可培养中度嗜盐菌的多样性和系统发育关系, 而且也表明了16S rRNA高度相似菌的16S-23S rRNA ISR在进化的过程中发生了某些突变。

摘要:应用纯培养手段和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析, 对从塔里木盆地高盐环境土壤样品中分离的18株可培养嗜盐放线菌多样性进行了研究。实验结果表明, 18株嗜盐放线菌可归为3个科(Glycomycetaceae、Pseudonocardineae和Nocardiopsaceae), 在有效发表的5个属的嗜盐放线菌中有4个属的嗜盐放线菌被分离到。多数菌株属于Actinopolyspora属(38.9%)、Nocardiopsis属(27.8%)和Streptomonospora属(22.2%), 是塔里木盆地高盐环境中嗜盐放线菌的优势类群。这些分离菌株中, 菌株YIM 92370与最近种的相似性为92%, 在Glycomycetaceae科内形成一个独立的分支, 极有可能代表Glycomycetaceae科的一个新属。研究结果表明塔里木盆地高盐环境中存在有较为丰富的嗜盐放线菌系统发育多样性, 并且潜藏着新类型的放线菌资源。

摘要:聚γ-谷氨酸(γ-PGA)是一种应用前景良好的生物高分子材料。通过构建含有α-淀粉酶(amyE)基因两端交换臂的整合载体pDG1730-vgb, 将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)整合到聚γ-谷氨酸生产菌株地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02染色体中, 获得重组子M2。一氧化碳差光光谱结果验证M2中表达了有活性的血红蛋白, 3 L发酵罐分批发酵结果显示M2的生物量比出发菌株WX-02提高了25.5%, γ-PGA产量提高了20%。

摘要:本文利用PCR和RACE技术首次从毛木耳AP4菌株中获得编码漆酶基因的cDNA及其基因组全长序列, 基因组大小为2514 bp。通过比较该漆酶基因的cDNA和基因组DNA的全长序列, 发现该基因包含14 个外显子和13 个内含子。cDNA序列的全长为1972 bp, 其包含一个完整的ORF, 长度为1860 bp, 编码619氨基酸, 推测的分子量大小为68 kD, 等电点pI为5.15。在氨基酸序列的氨基末端存在一个信号肽序列, 同时该基因还包括含铜氧化酶的三个功能结构域KOG1263、SufI和pfam00394。氨基酸序列与GenBank中登录的真菌漆酶蛋白序列比对表明：该氨基酸序列与其它真菌漆酶蛋白序列有较高的同源性, 氨基酸序列相同性最高达41%, 相似性为58%, 并且含有真菌漆酶的四个保守的Cu-bind结构域。将获得的漆酶基因lac1与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接, 构建重组质粒pYH3660, 将其转化到毕赤酵母中, 经甲醇诱导该基因在第10天产酶高达123 IU/L, 并通过Native SDS-PAGE电泳获得预期大小的漆酶蛋白条带。结构分析和功能验证均表明：本研究获得的基因lac1为漆酶基因。

摘要:用不依赖细菌培养的16S rDNA-PCR-DGGE方法对福建省6个不同地区12个取样点的稻田土壤进行细菌群落结构分析。对12份样品直接提取其总DNA, 用F341GC/R534引物扩增16S rDNA基因的 V3可变区, 结合DGGE(denaturing gradient gel electrophoresis)技术分析样品细菌群落组成。结果表明, 福建省不同地区的稻田土壤之间细菌群落结构存在较大差异, 大体上可分为闽东、闽南、闽北、闽西4个大类。同一地区的根际土和表土样品之间也存在差异, 但差异相对较低, 其中龙岩根际土和表土细菌群落结构相似性最大, 永泰差异性最大。回收了DGGE图谱中11个条带, 测序结果经过Blast比对表明其中10个条带代表的细菌是不可培养的, 显示了DGGE技术的优越性。

摘要:采用大田试验方法, 研究了模拟紫外辐射(UV-B, 280 nm~310 nm)增强对4个UV-B辐射敏感性不同的割手密无性系根际真菌数量和优势种群的影响。结果表明：UV-B辐射增强不改变割手密根际真菌的数量在分蘖期最大、幼苗期次之、伸长期和成熟期较少的规律性; UV-B辐射增强条件下, 割手密耐性无性系根际真菌数量显著增加, 并显著多于敏感无性系, 但UV-B辐射使割手密无性系根际真菌的优势种群组成减少, 优势种群以青霉属真菌为主。

摘要:本文应用荧光假单胞杆菌的16S-23S ribosomal RNA序列以及部分抗菌素合成基因序列的PCR鉴定引物, 对从烟草根际分离到的400份细菌进行了鉴定, 结果获得了21份含Prn(硝吡咯菌素)合成酶基因的荧光假单胞杆菌和1份含有DAPG(2, 4-二乙酰基藤黄酚)合成酶基因以及PCA (Phenazine-1-carboxylic acid, 吩嗪-1-羧酸)的荧光假单胞杆菌。室内实验结果表明, 含DAPG和PCA的荧光假单胞杆菌对烟草炭疽病具有明显拮抗作用。

摘要:从两个甘蔗品种GT11和RB86-7515表面灭菌的茎中分离到两株具有固氮活性的菌株, 分别编号为B11S和B8S。利用16S rRNA 序列分析对其进行鉴定, 并对两个菌株的生物学特性进行了比较。结果表明：B11S菌株与Stenotrophomonas maltophili菌株处在同一个分支, 其序列与多个Stenotrophomonas maltophili菌株的序列相似性都达到98%以上, 菌株B8S与多个土壤杆菌属细菌的序列相似性达到100%; 两个菌株在温度31°C、pH为6左右时生长量最高; 温度31°C、pH为6.5~7.0时固氮酶活性最高; 相同浓度的蔗糖生长量大于葡萄糖, 且表达固氮酶活性也最强; 添加一定量的氮素有利于细菌生长和固氮酶活性的表达, 但随着N含量的增加, 抑制作用越来越明显。

摘要:为了从棉花根际土壤筛选能与棉花凝集素具有亲和作用的高效促生细菌, 以选择性培养基从棉花根部初步筛选具有固氮能力、解磷能力及解钾能力的促生细菌, 再以异硫氰酸磺(FITC)标记的棉花凝集素为复筛工具, 从棉花根际促生细菌中筛选能与棉花凝集素结合的亲和性菌株, 分别挑选2株固氮菌、2株解磷细菌和2株解钾细菌作为微生物肥料接种到棉花根部进行盆栽试验, 观察其在根部定殖情况。结果是在选择性平板上有20%~30%的菌株具有凝集素染色阳性。盆栽试验显示, 接种的6株亲和性菌株能在棉花根部成功定殖, 根际细菌数量约是灭活对照的10倍。通过初步鉴定, 固氮菌株N1111为固氮菌属(Azotobacter), N2121属于德克斯氏菌属(Derxia); 解磷菌株P2126属于黄单胞菌属(Xanthomonas), P1108菌株为假单胞菌属(Pseudomonas); 解钾菌株K2204和K2116属于芽孢杆菌属(Bacillus)。

摘要:采用盆栽试验的方法对番茄根际主要微生物种群在不同生育期的动态变化进行了跟踪研究。结果表明, 在番茄整个生育期内, 可培养细菌数量在初花期和初果期时最多; 放线菌数量从苗期到末期逐渐减少; 真菌数量逐渐增多。番茄对细菌根际效应明显。DGGE图谱显示不同生育期番茄根际均具有较高的细菌多样性。根际细菌种类和数量在初花期发生较为显著的变化, 初果期根际群落多样性指数(H)和物种丰度(S)值都达到最高, 微生物最丰富, 是筛选拮抗菌的较好时期。

摘要:为了扩大苏云金芽胞杆菌的杀虫谱及生防范围, 通过抑真菌和杀虫生物活性测定, 筛选到一株抑真菌并对甜菜夜蛾高效的菌株Bt519-1。此菌株对所测试的小麦赤霉、黄瓜灰霉等8种真菌都有不同程度的抑制作用, 且完全抑制这些真菌孢子的萌发。通过室内生物测定发现该菌株对甜菜夜蛾具有很高的杀虫活性, 半致死浓度(LC50)仅为5.5 μg/mL。经特异引物检测, 证明该菌株含有6种杀虫蛋白基因：cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1I、cry2和vip3A。经SDS-PAGE分析, Bt519-1菌株分别产生分子量大约为135 kD~130 kD、95 kD、80 kD、70 kD和65 kD~60 kD的几种杀虫晶体蛋白。在有无几丁质的培养基中都能产生较高活性的几丁质酶。试验证明苏云金芽胞杆菌Bt519-1是一株既杀虫又拮抗真菌的多功能生防菌株。

摘要:为了解和控制浓缩苹果汁中的嗜酸耐热菌, 采用酸化的凯氏培养基对苹果浓缩汁中的耐热菌进行分离、培养和鉴定, 并与标准菌株Aliyclobacillus acidoterrestris DSM3922进行了比较分析。结果表明, 分离到的2株污染菌均可以在21°C~55°C温度范围及2.4~6.2的pH值范围内生长, 符合脂环酸芽胞杆菌属嗜酸耐热的特点。经与标准菌株的细胞、菌落形态观察、生长条件和生理生化反应等方面的比较表明, 2株分离菌与标准菌株Aliyclobacillus acidoterrestris DSM3922有明显的相似特征。

摘要:应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段, 在Dulac细胞中进行分离和培养, 扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示, 扩增产物与家猪源参考毒株的序列同源性均在98%以上, 该病毒与家猪源病毒差异不大。

摘要:为了初步研究蛇足石杉内生真菌g5发酵产物的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制动力学以及对该株真菌做初步形态学鉴定, 采用DTNB显色法检测g5发酵液醇提物抑制AChE活性的效果, 并采用玻片培养法进行真菌鉴定。结果发现g5菌株属于半知菌目丛梗孢科青霉属; 其发酵液醇提物对AChE的抑制作用表现为混合竞争型可逆抑制, 其对游离酶的抑制常数KI与对酶底物络合物的抑制常数KIS分别为0.0789 mL和1.1352 mL, 因此g5菌株代谢产物可作为开发AChE抑制剂类药物的潜在资源。

摘要:为了探讨NF-κB启动的炎症反应在小鼠侵袭性肺曲霉病肺损伤中的作用, 将小鼠分3组:正常组、正常+烟曲霉菌接种组、IPA模型组, 小鼠鼻吸入烟曲霉菌第4天处死, 取肺组织, 肺组织切片经HE染色观察病理损伤; 比色法测定肺组织MPO活性; 免疫组化法评价肺组织NF-κB p65蛋白的活化; RT-PCR法检测肺组织TNF-α、IFN-γ和β-tublin mRNA的表达。 结果显示, 正常健康组小鼠肺组织结构正常, 未见炎症发生; 正常+烟曲霉菌接种组小鼠肺组织有炎症细胞浸润, 未见孢子萌芽; IPA模型组小鼠的肺组织病理损伤严重, 可见炎症细胞浸润, 孢子萌芽生成菌丝。正常+烟曲霉菌接种组和IPA模型组小鼠肺组织的TNF-a和IFN-γmRNA的相对表达水平、NF-κB p65免疫组化评分和MPO活性均高于正常组小鼠(P<0.05); 并且IPA模型组小鼠肺组织NF-κB p65免疫组化评分值和MPO活性均高于正常+烟曲霉菌接种组(P<0.05)。结果提示, 烟曲霉菌感染可激活小鼠肺组织NF-κB介导的炎症信号通路, 诱导下游TNF-a和IFN-γ的表达, 募集大量的中性粒细胞于感染组织, 是导致IPA小鼠肺组织严重病理损伤的因素之一。

摘要:植物内生菌由于其独特的生态学地位而广受关注, 近年来有关植物内生菌与宿主相互作用的研究取得了很大进展。本文综述了植物内生菌通过分泌促生物质、拮抗病原菌等实现与宿主共生互作, 同时植物为内生菌提供适宜的黏附表面, 使其形成以生物薄膜(biofilm)为主要形式的多细胞聚集体结构以更好地适应周围的生存环境, 从而更加高效地对植物产生促生作用。本文论述了内生菌在与植物的互作中形成的多细胞聚集结构在抵抗非生物胁迫方面的独特生理及生态学意义, 结合水稻内生成团泛菌YS19形成多细胞聚集体symplasmata现象及其生物学效应, 对未来有关植物内生菌的研究方向提出了一些看法。

摘要:角黄素是一种非维生素A源的酮式类胡萝卜素, 具有抗氧化、免疫促进及增强细胞间隙连接通讯等多种生物学活性。大量的流行病学调查, 组织培养, 动物试验及人体干预试验表明, 角黄素对多种癌症具有预防和治疗的功效。此外, 角黄素还能够提高免疫力, 保护皮肤和骨骼健康。目前市场上供应的角黄素产品主要通过有机化学合成制得。然而, 天然角黄素容易吸收并且不涉及化学工艺而更受消费者欢迎。近年来, 越来越多的产角黄素微生物菌株被分离和纯化, 使得天然角黄素有进一步扩大应用的潜力和发展前景。从发酵培养的细菌中提取角黄素具有菌体繁殖速度快, 生产周期短, 发酵工艺较为成熟等优势, 进行高细胞密度生产比较容易。因此, 国外各国均把利用微生物发酵技术合成天然角黄素作为主攻方向, 进行天然角黄素的研究与开发。在此, 就角黄素的理化性质、医学应用、天然角黄素研究与开发的最新研究进展进行阐述和讨论, 为我国角黄素的开发研究提供参考。

摘要:抗菌肽是生物体产生的一类具有抵抗外源性病原体功能的小分子多肽, 具有抗细菌、真菌、病毒、癌细胞等多种活性。近几年的研究发现细菌会对抗菌肽产生耐药性。本文就细菌的构成性耐药性机制和诱导性耐药性机制等研究进展进行综述。

摘要:黑酵母是可产生黑色素的一类酵母菌总称。它们一般生长缓慢, 形态复杂, 抗逆性强。本文综述了黑酵母分类鉴定、生态学、抗逆性、致病性和黑色素应用等方面的研究进展。Hortaea werneckii已成为研究盐胁迫响应蛋白及固醇合成的新的模式生物, Aureobasidium pullulans也有望成为研究发育调控的模式种类。

摘要:在葡萄酒酿造中, 为了提高其稳定性及质量, 经常利用乳酸菌进行苹果酸-乳酸发酵。苹果酸-乳酸发酵一般自发进行, 也可以接种乳酸菌。本文从酿酒酵母与乳酸菌的交互作用及酚类物质和酿酒工艺对乳酸菌的作用等方面进行了综述, 讨论了葡萄酒生态环境对乳酸菌代谢的影响, 为苹果酸-乳酸发酵的有效控制提供一些参考。

摘要:磷脂酶D(phospholipase D, PLD)普遍存在于细菌、真菌以及哺乳动物中。在病原微生物中, PLD作为毒力决定因子在减数分裂、孢子形成等过程中起作用; 在哺乳动物细胞中, PLD主要在胞膜转运、调节有丝分裂和细胞肌动蛋白骨架等一些信号转导中起作用。在病原菌感染宿主细胞的过程中, 病原体和宿主细胞的PLD都被激活并发生级联反应, 病原菌PLD可调节自身肌动蛋白丝的聚合和重排, 并引起宿主细胞局部肌动蛋白丝的集聚, 诱导宿主细胞对其吞噬。深入探讨PLD激活对感染发生的调控作用对透彻理解病原菌感染宿主细胞的分子机制具有重要意义。

摘要:亚硝酸盐氧化还原酶(nitrite oxidoreductase, NXR)是硝化细菌将亚硝酸盐氧化为硝酸盐的关键酶, 广泛存在于亚硝酸盐氧化菌中。由于它是可溶性的膜内酶, 其催化机理与膜内电子传递密切联系, 给它的研究带来了一定的困难。本文综述了多年来国内外研究者从不同方面对NXR研究的成果, 详细论述了NXR的组成结构、工作机理以及不同因子对其活性的影响, 总结了近几年应用于研究NXR的新方法, 并展望了对NXR研究的发展方向及其意义。

摘要:种子际(Spermosphere)是植物微生态系统的重要组成部分, 在种子萌发的短暂时间内富于微生物群落的形成和功能的瞬时演替特性。萌发种子分泌物的瞬时演替释放对种子际固有和接种微生物的群落多样性、增殖和活性具有调控作用; 种子际微生物的趋化性对于微生物的定殖和对病原菌的拮抗能力以及生物防治效果有重要影响; 在种子际微生态学研究中, 应注意把握种子际分泌物释放的短暂时间框架和测试条件的统一性; 将微生物传统培养方法和非培养方法相结合, 该领域的深入研究将为根际微生物的起源以及有益微生物接种剂的合理应用提出新的见解和科学依据。

摘要:生物工程设备是现代工业生物技术转化为现实生产力和发挥作用的关键环节, 随着工业生物技术的迅速发展, 对掌握现代生物工程设备原理、设计和操作的人才的需求日益增加。本文分别从师资队伍建设、教材建设、教学内容及教学体系优化、教学方法革新等方面对生物工程设备精品课程建设经验进行了总结。

摘要:在有害微生物控制技术课程实施先学后教、师生互教教学模式, 经过教师4个阶段的引导, 营造了愉快和谐的教学氛围, 较好地实现了师生间的有效互动。这种教学模式确定了学生在学习过程中的主体地位, 有利于培养学生自主学习、表达交流沟通等多方面的能力, 增强他们的竞争与合作意识及质疑问难精神, 同时也可促进教师角色转变, 教学策略与技能改进。

摘要:改革传统的双语教学, 探索高校新型的双语教学方式已经成为教育教学改革的必然趋势。语码转换是指在一个语段或语篇中使用两种或两种以上语言的现象。为了保证双语教学效果, 提高教学质量, 在微生物学授课过程中应用语码转换的方式进行渗透式双语授课, 适时适量地向学生渗透专业英语语汇、语句、语段或语篇, 激发了学生的学习热情, 增强了学生英语表达的自信心。

摘要:用β-紫罗兰酮作为筛选剂选择性分离海洋红酵母虾青素高产突变菌株。实验结果表明, 在β-紫罗兰酮存在的情况下, 由于类胡萝卜素合成受到抑制, 海洋红酵母的生物量和虾青素合成量都减少; 当平板培养基中β-紫罗兰酮浓度达到370 mg/L时, 海洋红酵母的致死率为92.3%; 在这种平板培养基上涂布经甲基磺酸乙酯诱变的海洋红酵母, 随机筛选200个菌落, 结果表明生物量、虾青素体积产率和细胞产率均有所提高的正突变株占18%, 生物量、虾青素体积产率和细胞产率的单项指标有所提高的正突变株分别占22.5%、45%和46%。该实验结果表明在分离培养基中添加β-紫罗兰酮可选择性地分离海洋红酵母虾青素高产菌株, 提高虾青素高产突变株的筛选效率。

摘要:为了考察直接电解海水消除细菌污染的可能性, 本文将海水及海水稀释成不同浓度后通过氧化电解水装置进行电解不同时间后, 所得酸性电解海水、碱性电解海水和中性电解海水对病原菌[埃希氏大肠杆菌(Escherichina coli)、沙门氏菌(Salmonella)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria moncytogene)、摩化摩根菌(Morganella morganii)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)]以及食品加工表面接触材料(地板砖、不锈钢板、瓷砖、手套、抹布)的消毒效果进行分析研究。结果表明, 酸性电解海水具有良好的杀菌效果, 能将107 CFU/mL的病原菌悬液在1 min内几乎全部杀死。碱性电解海水和中性水无明显的杀菌效果。通过模拟食品加工过程, 对食品加工表面接触材料人为染菌, 研究电解海水对表面材料的消毒效果, 结果表明酸性电解海水仍能将表面材料含有的107 CFU/cm2病原菌在5 min之内几乎全部杀灭。由此说明电解海水对食品加工表面接触材料具有明显的消毒效果, 能取代以淡水为原料的电解水杀菌效果是高效廉价和不浪费淡水资源的一种理想消毒剂。

摘要:本研究通过对6种土壤总DNA提取方法(CTAB-SDS-冻融法、玻璃珠-SDS-酚氯仿抽提法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-SDS法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-溶菌酶法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-冻融法和UltraClean试剂盒法)和4种纯化方法(改进琼脂糖凝胶电泳法、2％聚乙烯吡咯烷酮-琼脂糖凝胶电泳法、PVPP层析柱法和低熔点琼脂糖电泳法)的比较, 证明利用20 mmol/L EDTA (pH 7.5)预处理土壤后, 利用CTAB-SDS-冻融法提取土壤总DNA并经改进琼脂糖凝胶电泳法纯化获得的浙贝母根际土壤总DNA的得率和纯度相对较高, 达44.00 μg/g±2.65 μg/g土壤, 可用于后续基于16S rDNA分析基础上的土壤微生物分子生态学的分析工作。

摘要:为了应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中阪崎肠杆菌的快速检测方法, 根据阪崎肠杆菌16S-23S rRNA特异基因序列的特点设计特异性引物, PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以阪崎肠杆菌等59株参考菌株做特异性试验; 阪崎肠杆菌菌株稀释成不同梯度, 做灵敏度试验, 结果表明该方法具有很好的特异性, 方法灵敏度较高, 检测低限可达到为25 CFU/mL; 该方法可以快速、准确检测阪崎肠杆菌, 是食品中致病菌快速检测的新技术。